环扎大鼠脊髓损伤早期不同时机减压后光密度测量热休克蛋白70的表达及其与神经细胞凋亡的相关性研究(2)
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1.4 标本采集、制备与HE染色 大鼠模型分别在手术减压后1 d、3 d、7 d、14 d、21 d五个时间，将对照组和脊髓损伤组的大鼠经心脏灌注取材，灌注后脊髓已被多聚甲醛固定变硬，以环扎损伤部位为中心、取出其上下段共1.5 cm脊髓组织，浸泡于相同甲醛溶液中后固定72 h。损伤下端0.5 cm以4 μm厚度切片，脊髓取冠状面，捞片于涂有多聚赖氨酸的载玻片上，标签晾干玻片分别行HE染色。
1.5 免疫组织化学染色 分别取脊髓损伤下端组织切片用Rabbit Anti-Hsp70抗体进行SABC免疫组织化学染色，使用DAB显色试剂盒，TUNEL法观察神经细胞的凋亡水平，使用DAB显色试剂盒染色检测，所有实验步骤严格按照该试剂的标准和流程进行。使用数码相机(NIKON-4300日本)对显色的图片摄像。
1.6 光密度测量 在普通光学显微镜(日本Olympus公司)下观察每组不同时间下染色特点。每一染色切片随机取5个高倍视野(10×40)进行显微摄影(Nikon Eclipse 80i显微成像系统)获取图像，调试完成后，维持采集的各项设置不变，一次性采集出所有样本的图像，每张切片至少随机采集5个视野。使用图像分析软件(Image-Pro Plus 6.0美国)对每张切片进行光密度测定。积分光密度(IOD)可反映所测结构的光密度与面积的综合变化，IOD与物质的质量成正比，其数值反映物质的相对含量 [3，4]。
1.7 统计学处理 采用SPSS 17.0软件进行数据分析，各组数据采用均数±标准差(x±s)表示，四组数据均呈正态分布，方差齐性检验采用比较均值单因素方差同性检验，组内组间比较采用一般线性模型单变量方差检验，HSP70阳性细胞数与神经细胞凋亡细胞数相关性采用直线相关分析。以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 HSP70积分光密度 使用图像分析软件(Image-Pro Plus 6.0美国)对每张切片进行光密度测定，在400倍每张切片至少随机采集5个视野。A组偶见阳性面积，各时间点无显著差异。阳性面积D组高于C组 ......
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