血浆一氧化氮水平与支气管哮喘的相关性研究(2)
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1.2 方法
1.2.1 肺功能测定 所有对象入选时采用肺活量计法测定第1秒用力呼气容积占预计值百分比(FEV1.0%百分比)、FEV1.0/FVC及呼气峰流速(peak expiratory flow， PEF)。
1.2.2 血浆一氧化氮水平测定 血浆NO含量的间接测定，硝酸还原酶测定法。因NO化学性质活泼，半衰期极短，迅速与分子氧反应生成NO2-和NO3-，故以血浆NO2-和NO3-之和检测NO的相对含量，应用Bioting-Tech公司提供的NO测定试剂盒，采用硝酸还原酶特异性地将NO3-还原为NO2-，NO2-与显色剂亚乙烯二胺作用，生成粉红色偶氮化合物，通过比色测出NO2-/NO3-含量[4]。
1.2.3 诱导痰细胞计数分类 参照文献[5]报道的方法进行：受试者测试肺功能FEV1.0>FEV1.0pre的60%，可以进行痰液诱导，试验前受试者漱口后，吸入沙丁胺醇(万托林)400 μg，15 min后开始超声雾化吸入4%(质量分数)的高渗盐水40 ml，20～40 min后收集痰液，加入等量0.1%(质量分数)二硫苏糖醇(DTT)溶液，振荡至痰液完全均匀化开，取50 μl痰液注入细胞池作细胞计数，其余痰液在常温下3500 r/min离心10 min，取上清液分装，-80 ℃保存待测。离心沉渣涂片行瑞氏-吉姆萨染色作细胞分类计数。
1.3 统计学处理 采用SPSS 10.0统计软件进行统计学分析，数据以(x±s)表示，两组之间比较采用t检验，多组之间比较采用单因素方差分析(F检验)，采用Pearson相关分析计算相关系数，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 一般情况 正常对照组FEV1.0%预计值为(89.7±6.5)，FEV1.0/FVC值为(81.7±8.5)，PEF%预计值(95.7±13.5)；哮喘缓解期组FEV1.0%预计值为(67.7±5.5)，FEV1.0/FVC值为(65.7±3.5)，PEF%预计值(69.8±19.5)；轻度急性发作期组FEV1.0%预计值为(58.7±7.2)，FEV1.0/FVC值为(59.6±7.5)，PEF%预计值(57.6±18.5)；中度急性发作期组FEV1.0%预计值为(50.7±4.9)，FEV1.0/FVC值为(52.8±5.3)，PEF%预计值(49.8±20.5)；重度急性发作期组FEV1.0%预计值为(40.7±4.8)，FEV1.0/FVC值为(48.8±7.8)，PEF%预计值(40.3±21.6)。各组的FEV1.0%预计值、FEV1.0/FVC值及PEF%预计值比较差异均有统计学意义(F值分别为23.132、25.012、21.025，P<0.01)。
2.2 血浆NO比较 健康对照组的血浆NO水平为(43.28± 4.06)μmol/L，哮喘临床缓解组为(56.30±3.07)μmol/L，急性发作期轻度组为(65.57±2.38)μmol/L，中度组为(71.73±6.08)μmol/L，重度组为(87.36±7.15)μmol/L，各组比较差异均有统计学意义(F=23.5，P<0.101)。
2.3 诱导痰细胞计数分类 诱导痰细胞总数、中性粒细胞百分比、巨噬细胞百分比及嗜酸性粒细胞百分比在各组之间的比较差异均有统计学意义(F值分别为8.753、21.856、32.526、19.827，P<0.01)，诱导痰淋巴细胞百分比在各组之间差异无统计学意义(F=0.461，P>0.05)。见表1。
2.4 相关性分析 研究对象所处的状态(健康、哮喘缓解期及哮喘发作期)与血浆一氧化氮水平明显相关(r=0.786，P<0.01)。急性发作期患者血浆一氧化氮水平与FEV1.0%预计值呈负相关(r=-0.872，P<0.01)，与诱导痰细胞总数、中性粒细胞百分比及诱导痰嗜酸细胞百分比呈正相关(r分别为0.857、0.816和0.825，P<0.01)，与诱导痰巨噬细胞百分比呈负相关(r=-0.820，P<0.01)。
3 讨论
支气管哮喘(简称哮喘)的发作是由于炎性细胞及某些结构性细胞释放的多种细胞因子和趋化因子组成的复杂网络，主要包括气道炎症、免疫与变态反应、气道神经调节以及遗传机制等，在内外因素的作用下，发生调控异常，导致炎症-上皮细胞-气道重塑-炎症加重的恶性循环，牵涉多种炎症介质及细胞因子。目前，合适的哮喘标志物及气道炎症介质的测定成为哮喘气道炎症研究新的热点课题。
本研究表明，支气管哮喘组的血浆一氧化氮水平显著高于正常对照组，其中急性发作期组显著高于缓解期组，急性发作期组中轻度、中度、重度三者之间比较差异均有统计学意义(P<0.01)。线性相关性分析显示，一氧化氮水平与支气管哮喘发作有相关性。与罗春玲[6]报道的一致。Ward等[7]通过实验发现，NO供体可明显抑制乙酰胆碱、组胺、白三烯D4所致的气道收缩，NOS抑制剂L-NAME可以减弱由于干冷空气、运动所引起的气道收缩，但不影响乙酰胆碱释放，提示NO有对抗乙酰胆碱收缩气道平滑肌的作用，cNOS来源的NO可以松弛气道平滑肌，对气道平滑肌调节发挥作用；但哮喘发作时，cNOS来源的NO生成减少，气道非肾上腺素能非胆碱能神经功能发挥不足，而iNOS活性大大增强导致局部NO大量产生，当体内持续大量合成NO，在发挥免疫效应的同时也造成局部组织损伤。NO造成气道损伤的机理为，直接损伤气道组织细胞的DNA、线粒体及含铁酶类的活性，在气道内的特殊化学环境中和O2-形成过氧化亚硝酸(ONOO-)，与其他氮氧化物相互转变，形成NO2等高毒性物质。血浆中大量的NO更多表现为细胞毒性作用，致毛细血管后微静脉渗出增多，加重肺通气/血流比例失调及加重支气管痉挛。
哮喘时，嗜酸性粒细胞会显著的升高已被公认，并与哮喘严重程度成正相关；它主要通过释放胞质中的主要碱基蛋白(MBP)、嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ECP)、嗜酸性粒细胞衍生性神经毒素(EDN)等毒性颗粒蛋白损伤靶器官，这些颗粒蛋白是造成哮喘特征性表现的主要原因之一[8]。哮喘气道炎症时，嗜酸性粒细胞释放NO的同时又促进嗜酸细胞的趋化 ......
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