异种生物衍生骨与兔骨髓间充质干细胞的体外黏附实验研究(1)
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【摘要】 目的：探寻良好的骨组织工程支架材料。方法：以市售新鲜猪股骨制备一种生物骨衍生材料，将材料与兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)复合培养，扫描电镜下对复合培养过程进行动态观察。结果：异种生物衍生骨具有三维立体多孔结构，并有良好的生物相容性和材料细胞界面。结论：异种生物衍生骨是一种具有临床应用前景、适用于构建组织工程骨的支架材料。
【关键词】 骨支架材料； 生物衍生骨； 骨髓间充质干细胞
Experimental Study of Rabbit Bone Mesenchymal Stem Cells With Xenogeneic Biological Derivative Cancellous Bone/XIAO Shi-hui，WEI Qing-jun，WEI Ji-hua，et al.//Medical Innovation of China，2012，9(13)：003-005
【Abstract】 Objective：To explore good bone tissue engineered scaffold.Methods：To made biological derivative bone material with fresh pig femoral，then coculture with rabbit bone mesenchymal stem cells，the cell attachment and growth were detected to evaluate the celluar compatibility to biomaterial.Results：Xenogeneic biological derivative cancellous bone have 3D porous structure，meanwhile have good biocompatibility and material-cell interface.Conclusion：There are bright prospects in clinic application for the xenogeneic biological derivative cancellous bone，applicable to the construction of the bone tissue engineering.
【Key words】 Bone scaffold material; Biological derived bone; Bone mesenchymal stem cells
First-author’s address：The First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University，Nanning 530021，China
doi:10.3969/j.issn.1674-4985.2012.14.002
创伤、肿瘤术后等原因常常造成大段骨缺损、肢体功能丧失。为了满足修复治疗的需要，众多研究者摸索了大量修复骨缺损的方法，目前组织工程提供了一个新的途径，运用组织工程的方法，以支架材料为载体，复合分离的种子细胞，在体外预先构建有生命的种植体，植入体内以修复组织缺损，替代后重建器官结构，维持改善组织器官功能。本实验从探寻良好的骨组织工程支架材料的目的出发，拟制备一种生物骨衍生材料，将此材料与兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外复合培养，通过电镜对复合培养过程进行动态观察，了解该材料与BMSCs的生物相容性及黏附情况，寻找一种有临床应用前景，适用于构建组织工程骨的支架材料。
1 材料与方法
1.1 实验动物 纯种新西兰大白兔1只，4周龄，体重1.5 kg，购自广西医科大学实验动物中心。
1.2 主要仪器 培养箱(HERACAN 150i)，超净工作台(苏净)，倒置显微镜(OLympus CKX41)，离心机(上海飞鸽)，VEGA3 TESCAN扫描电镜(捷克)，低糖DMEM培养基(Hyclone)，胎牛血清(杭州四季青公司)，0.25%胰蛋白酶(吉诺)。
1.3 实验方法
1.3.1 生物衍生骨的制备 取新鲜市售新鲜猪股骨，剔除周围软组织、骨膜和关节软骨，保留松质骨，再将其制成1 cm×0.4 cm×0.3 cm的骨条，经脱蛋白、脱脂、脱钙后制成生物衍生骨，-80 ℃深低温冰箱保存48 h后，经环氧乙烷消毒，-4 ℃保存备用。取部分骨支架做扫描电镜观察支架形态[1]。
1.3.2 兔BMSCs的分离 3%戊巴比妥钠按1 ml/kg剂量经兔耳缘静脉行全身麻醉。常规消毒铺巾，于双侧股骨近端及胫骨近端作骨穿(注射器内含0.2 ml的肝素钠200 U/ml)，抽取骨髓4~5 ml，抽出的骨髓血立即用等量的PBS洗涤后，离心1000 r/min，离心5 min，弃去上清液，重复上述操作2次后，接种于50 ml的培养瓶，置于37 ℃、5% CO2培养箱中培养，3 d后全量换液，去除悬浮细胞。原代培养细胞长满瓶底面积80%~90%时，加入0.25%胰蛋白酶消化2~3 min，加含血清的DMEM培养基终止消化。1000 r/min离心5 min，弃上清液，以1∶3接种。
1.3.3 细胞与支架的复合 无菌条件下取第3代骨髓间充质干细胞(BMSCs)，以胰蛋白酶消化细胞后吹打制成单细胞悬液，调整细胞数量约为2×106/ml ......
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