虹吸法与离心法制备冷沉淀的质量分析
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【摘要】 目的：通过对虹吸法与离心法制备的冷沉淀的质量分析，选择合适的方法制备冷沉淀。方法：随机取24袋新鲜冰冻血浆，随机分为两组，每组12袋，分别用虹吸法和离心法制备冷沉淀，测定冷沉淀中凝血因子Ⅷ和纤维蛋白原的含量。结果：虹吸法与离心法制备的冷沉淀，其凝血因子Ⅷ的含量分别为(120±11)IU/袋，(90±9)IU/袋，两者比较差异有统计学意义(P<0.01)；纤维蛋白原的含量分别为(165±12)mg/袋，(168±10)mg/袋，两者比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论：虹吸法制备冷沉淀简便、快捷，凝血因子Ⅷ含量高，优于离心法，值得推广应用。
【关键词】 冷沉淀； 凝血因子Ⅷ； 纤维蛋白原
冷沉淀是临床上较常用的一种血液成分，它是由新鲜冰冻血浆在2～6 ℃环境下融化后残留的白色沉淀物。其主要成分是凝血因子Ⅷ、纤维蛋白原、纤维结合蛋白、血管性血友病因子等，特别是冷沉淀中Ⅷ因子是体内纤溶系统的重要成分。但由于Ⅷ容易受外界因素影响而不稳定，所以不同的制备工艺和设备所制备的冷沉淀，其质量存在较大差异。为了选择一种合适的方法制备冷沉淀，笔者分别运用CT—4T.6C型低温水浴融化箱融化新鲜冰冻血浆虹吸法和4 ℃冰箱融化新鲜冰冻血浆离心法制备冷沉淀并进行质量比较，现报告如下。
1 材料与方法
1.1 血液来源 制备冷沉淀的原料浆均来源于笔者所在市无偿献血者的合格血液，采集全血400 ml(要求采血顺利，血流通畅无凝块)，6 h内分离出血浆约220 ml并在血浆速冻机中冰冻成块，贮存在—30 ℃以下的冰箱中备用。
1.2 仪器设备 CT—4T.6C型低温水浴融化箱(美国Cytotherm公司)，4 ℃日本三洋冰箱，索福RC—12BP大容量离心机，CA—50凝血酶仪(日本Sysmex公司)。
1.3 冷沉淀的制备方法
1.3.1 虹吸法 运用CT—4T.6C型低温水浴融化箱融化新鲜冰冻血浆虹吸法制备冷沉淀。制备方法为：将12袋待制备冷沉淀的新鲜冰冻血浆，置于温度恒定在6 ℃的CT—4T.6C型低温水浴融化箱的水浴箱中，融化15 min后血袋管道变软，松开转移空袋的止流夹，将转移空袋置于水浴箱外，位置低于血浆袋，两袋之间形成一定的高度落差。在血浆融化的过程中水浴箱不停地摇晃，使水和新鲜冰冻血浆能充分地接触，保证血浆受热均匀。血浆融化后，随时被虹吸至转移空袋中，当血浆融化至剩下40～50 ml血浆与沉淀物时，闭合导管，阻断虹吸，将血浆与沉淀物混合，即制成冷沉淀凝血因子，制备过程约需1 h。
1.3.2 离心法 运用4 ℃冰箱融化新鲜冰冻血浆离心法制备冷沉淀。制备方法为：取出12袋待制备冷沉淀的新鲜冰冻血浆，置(4±2)℃冰箱中融化10～11 h，待其融化至尚剩下少量冰渣时取出离心(3000 r/min，10 min，温度0～4 ℃)，移出上层血浆至转移空袋，将留下的20～30 ml血浆与沉淀物混合，即制成冷沉淀凝血因子。
1.4 统计学处理 采用SPSS 11.0统计软件包进行统计学分析，计量资料以(x±s)表示，采用t检验。P<0.05为差异具有统计学意义。
2 结果
12袋采用虹吸法和12袋采用离心法制备的冷沉淀，其凝血因子Ⅷ和纤维蛋白原的含量均达到我国的质量标准[1]，凝血因子Ⅷ的含量分别为(120±11)IU/袋，(90±9)IU/袋，两者比较差异具有统计学意义(P<0.01)；纤维蛋白原的含量分别为(165±12)mg/袋，(168±10)mg/袋，两者比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。
3 讨论
冷沉淀主要用于儿童血友病甲、血管性血友病、先天性或获得性纤维蛋白原缺乏症患者，冷沉淀也经常用于手术后出血，严重外伤及DIC等患者的治疗，是一种临床疗效显著，已被临床医师广泛接受的血液产品。因此血站应为临床提供优质高效的冷沉淀，以保证临床疗效。
新鲜冰冻血浆内含有全部的凝血因子，其中的Ⅷ因子是一种不稳定的凝血因子。新鲜冰冻血浆融化后，Ⅷ因子活性随着时间的延长而有明显的降低，其活性衰减了41.17%[2]，国内报道在1 h内融化完成所制冷沉淀质量最好[3]；Ⅷ因子在2～6 ℃的水浴中制备其回收率较高，在8 ℃以上产生自融。所以新鲜冰冻血浆的融化时间和融化温度是影响冷沉淀质量的关键因素。本文结果显示，虹吸法制备的冷沉淀Ⅷ因子含量较离心法制备的冷沉淀Ⅷ因子含量显著升高，比较差异有统计学意义(P<0.01)；但两种方法制备的冷沉淀纤维蛋白原含量比较差异无统计学意义(P>0.05)。这是因为运用CT—4T.6C型低温水浴融化箱融化新鲜冰冻血浆虹吸法制备冷沉淀仅需1 h，且可使水浴箱中水的温度恒定6 ℃，因而极大地避免了Ⅷ因子的丧失。而运用4 ℃冰箱融化新鲜冰冻血浆离心法制备冷沉淀，新鲜冰冻血浆需要在4 ℃冰箱中经过10～11 h缓慢融化至一定程度后，再进行离心分离，耗时长，离心时不可避免的温度上升，制备后期产品在室温下完成，均可导致Ⅷ因衰减较多。纤维蛋白原是一种稳定的凝血因子，受制备时间和制备温度的影响较小 ......
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