DADLE对大鼠急性全脑缺血再灌注后海马区神经元ERK信号通路和Caspase—3表达的影响(2)
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2 结果
2.1 各组ERK和P-ERK的表达 Sham组ERK和P-ERK阳性细胞数显著低于其他各组(P<0.05)，A组、B组、C组与I/R组相比，其ERK和P-ERK的阳性细胞数明显增加(P<0.05)。而各给药组之间ERK和P-ERK阳性细胞数为B组与C组的表达高于A组(P<0.05)，B组与C组间差异无统计学意义(P>0.05)。见表1、图1和图2。
2.2 各组Caspase-3蛋白表达水平 Caspase-3蛋白表达水平为各组目的条带的光密度值比上内参条带的光密度值，Sham组值为(0.3022±0.0432)，IR组为(0.9857±0.1381)，A组值为(0.5469±0.0864)，B组值为(0.3941±0.0595)，C组值为(0.4177±0.0679)。IR组与Sham组比较，海马组织Caspase-3蛋白表达明显上调(P<0.05)，A组、B组、C组与IR组比较，海马组织 Caspase-3蛋白表达明显下调(P<0.05)。而各给药组之间海马组织Caspase-3蛋白表达为B组与C组的表达低于A组(P<0.05)，B组与C组间差异无统计学意义(P>0.05)。见图3。
3 讨论
目前研究发现，缺血性脑损伤涉及到谷氨酸的兴奋性毒性、梗死周围去极化、炎症和延迟性神经元死亡等四个机制，均与胞内信号转导通路MAPK家族的调节有关[2]。丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)是真核生物中广泛存在的一类丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。胞外信号调控激酶(extracellular signal-regulated kinase，ERK)是发现的第1个MAPK，它调控多种重要的细胞生物学过程，包括细胞增殖、分化和凋亡等，特异地阻断ERK通路激活可促进细胞凋亡[3-4]。该激酶被上游蛋白磷酸化后成为活化形式(P-ERK)，进一步作用于胞浆内多种信号分子或细胞骨架蛋白，并可直接进入核内通过作用于转录因子，调控基因表达[5]。脑缺血再灌注时ERK活性增加是细胞针对缺氧刺激启动修复过程、促进细胞存活的保护性机制，对于经历了缺血再灌注损伤的神经元具有保护作用。本研究发现，I/R组海马神经元ERK和P-ERK的表达均较Sham组显著升高，DADLE处理后ERK和P-ERK的表达又较I/R组显著升高，而该保护作用是否与DADLE剂量有明显相关，则需作进一步研究。
Caspase家族是哺乳动物凋亡机制中关键因素，而Caspase-3被认为是此级联反应中最关键效应的蛋白酶。正常情况下，胞质中Caspase-3以无活性酶形式存在，被凋亡信号激活后断裂为大小两个亚基并结合为四聚体，成为活性酶，活性的Caspase-3进一步切割不同底物，导致蛋白酶切割联放大，DNA裂解，最终使细胞走向死亡[6-7]。本研究发现，I/R组海马神经元Caspase-3即有大量表达，DADLE处理后Caspase-3的表达均减少，而该保护作用是否与DADLE剂量有明显相关，则需要作进一步研究。
研究证实，δ阿片受体激动剂DADLE对大鼠全脑缺血再灌注损伤有保护作用[8]，DADLE成为近年来研究神经保护的领域中的热点。韩洁韵等[9]初步研究发现，DADLE对全脑缺血再灌注损伤具有保护作用，但其具体保护机制报道较少。本研究结果表明，DADLE处理组较缺血再灌注组的ERK和p-ERK升高明显(P<0.05)，提示DADLE可能通过调节ERK和p-ERK的表达起到保护脑组织的作用。Caspase-3是凋亡过程中的关键蛋白酶，Caspase-3蛋白含量增加，可引发细胞凋亡。本实验研究证明，SD大鼠脑缺血再灌注损伤后应用DADLE治疗可明显抑制Caspase-3的升高(P<0.05)，说明DADLE可通过抑制Caspase-3的活性升高而起到保护脑组织的作用。
综上所述，DADLE对大鼠急性全脑缺血再灌注后海马区神经元有保护作用，可能与其上调ERK信号通路以及抑制Caspase-3的表达有关。除此外DADLE是否还参与了其他的途径来降低神经元细胞的损伤还有待进一步深入研究。
参考文献
[1] 顾洋，苏殿三.delta阿片受体激动剂脑保护作用的研究进展[J].上海医学，2010，33(8)：784-788.
[2] 李军，曹红，曾邦雄，等.MAPK级联反应与缺血性脑损伤[J].国外医学：麻醉学与复苏分册，2002，23(4)：232-235.
[3] Bo nni A，Brunet A，West A E，et al.Cell surviva；promoted by the Ras-MAPK signaling pathway by transcription dependent and independent mechanisms[J].Science，1999，286(5443)：1358-1362.
[4] Murray B，Alessandrini A，Clie A，et al.Inhibition of the p44/42MAP kinase Pathway Protects hippocampal neurons in a cellculture model of seizure activity[J] ......
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