高效液相色谱—荧光法测定新生儿血清Phe和Tye浓度的价值分析
 |
| 第1页 |
参见附件。
【摘要】 目的：探讨高效液相色谱-荧光法测定新生儿血清Phe和Tye浓度在筛查新生儿苯丙酮尿症(PKU)的价值。方法：回顾21例确诊PKU新生儿的实验室资料作为观察组，选择同期22例健康新生儿作为对照组，全部采用高效液相色谱-荧光法测定Phe和Tye浓度，并计算Phe/Tye比值，分析测定对筛查新生儿PKU的价值。结果：观察组Phe浓度、Phe/Tye比值明显低对照组(P<0.01)；观察组Tye浓度明显高于对照组(P<0.01)。结论：通过高效液相色谱-荧光检测法能够快速、准确测定新生儿Phe和Tye浓度，在PKU的早期诊断、鉴别、评估疗效和评价预后等方面具有非常重要的意义。
【关键词】 幼儿血清； 血清苯丙氨酸； 血清酪氨酸； 苯丙酮尿症
血清苯丙氨酸(Phe)和血清酪氨酸(Tye)均参与蛋白质的合成，也是哺乳动物必需的氨基酸和生酮生糖氨基酸，科学测定两种物质在苯丙酮尿症(PKU)的诊断、治疗和预后方面具有非常重要的参考价值[1]。本研究采用高效液相色谱-荧光检测法测定确诊PKU和健康新生儿Phe浓度、Tye浓度及Phe/Tye比值，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 本研究所有资料来源于郑州市妇幼保健院2010年1月-2012年7月期间检验科，空腹静脉采血时间均在上午7∶30-10∶00，按照实验室操作规范待血清自然析出后行离心分离，然后在-30 ℃冰箱中保存待测。将21例经实验室确诊的PKU新生儿作为观察组，其中男12例，女9例；出生3～28 d，平均(16.4±4.5)d。选择同期22例健康新生儿作为对照组，其中男12例，女10例；出生3～28 d，平均(16.5±4.5)d。组间性别和出生时间比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。
1.2 测定设备、试剂和方法 所有新生儿均采用高效液相色谱-荧光检测法测定Phe和Tye浓度，并计算Phe/Tye比值。高效液相色谱仪及其附件由安捷伦公司提供；实验用水为超纯水，经美国Millipore公司Milli-Q纯水器处理；苯丙氨酸和酪氨酸标准品由美国Sigma公司提供；其他试剂为常规实验室优级纯或分析纯。测定方法参考蒋姣伏等[2]研究，按照实验室规范进行操作，色谱柱为Hypersil C8注，流动相为100：900体积比的乙腈-水，流速1 ml/min，荧光波长303 nm，激发波长210 nm。苯丙氨酸批内CV为4.08%，批间CV为7.11%，线性范围12.21～1220.03 μmol/L，最低检测限3.00 μmol/L，平均回收率102.52%；酪氨酸批内CV为2.98%，批间CV为5.24%，线性范围5.52～550.11 μmol/L，平均回收率102.19%，最低检测限0.82 μmol/L。
1.3 计算方法 血清苯丙氨酸(酪氨酸)=苯丙氨酸(酪氨酸)峰面积×标准液中苯丙氨酸(酪氨酸)浓度÷标准液中苯丙氨酸(酪氨酸)峰面积。
1.4 统计学处理 所有数据采用SPSS 19.0统计软件包进行分析，计量资料以(x±s)表示，采取t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
3 讨论
作为人体不能自身合成的必须氨基酸和芳香族氨基酸之一，苯丙氨酸具有非常显著的生理活性，在机体内可被辅酶四氢生物蝶呤不可逆地转化为酪氨酸，再经酪氨酸途径代谢为肾上腺素和黑色素，最终经转氨基生成少量苯丙氨酸。当机体内辅酶四氢生物蝶呤合成缺陷或编码聚羟基脂肪酸酯途径的基因发生改变时，酪氨酸羟化生成系统被破坏，降低或消失了聚羟基脂肪酸酯活性，肾上腺素和黑色素未能正常代谢而大量蓄积，从而增多了苯丙酮酸的生成，如果经实验室检测发现血和尿中出血高浓度苯丙酮酸，则严重影响婴儿的智力发育，表现为PKU。现代研究证实，大量苯丙氨酸能够抑制神经元突触的形成和其他氨基酸进入大脑，从而影响大脑的发育，同时苯丙氨酸循旁路途径代谢为苯丙酮酸随尿液排出，表现为苯丙酮酸尿症[3]。因此，科学测定正常幼儿血清苯丙氨酸、酪氨酸水平及比值对诊断和鉴别PKU尤为重要。
目前实验室检测的方法较多，主要有细菌抑制法、高效液相色谱法或荧光法等，其中细菌抑制法由于操作简便和成本低等因素适用于大规模检测Phe浓度，但半定量的检测耗时较长，检测结果容易受血清标本中抗生素影响较大；单纯荧光法测定血清Phe浓度定量优势明显，在自动化处理系统下灵敏度和精确度等方面优于细菌抑制法，但检测时间在4 h左右，同时荧光试纸空白校正非特异荧光能够提高精确度，当不同厂家试剂盒和仪器检测值差距较大，参考价值有效；高效液相色谱法对仪器和检验人员要求较高，不仅可以同时定量检测Phe浓度和Tye浓度，而且具有快速、高效和灵敏度高等特点，是早期诊断和预防PKU的有效方法之一。高效液相色谱-荧光检测法能够同时检测Phe浓度和Tye浓度，在短时间内经色谱柱分离后用荧光检测器在选定激发和发射波长完成检测，临床检测和诊断更加简便、快捷和准确。本研究观察组Phe浓度、Phe/Tye比值明显低于对照组(P<0.01)；观察组Tye浓度明显高于对照组(P<0.01)，与包日新等[4]研究基本一致。通过高效液相色谱-荧光检测法能够快速、准确测定新生儿Phe和Tye浓度 ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件(1897kb)。