DNA定量分析在宫颈癌早期筛查中的应用价值
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【摘要】 目的：探讨DNA定量分析在宫颈癌早期筛查中的应用价值。方法：以2010年4月-2012年4月中山市人民医院妇产科行常规妇检的1000例患者为研究对象，所有患者进行宫颈脱落细胞DNA定量分析方法、液基细胞学检查、杂交捕获HPV三种方法检测，分析其相关性及各组和相互联合检查在宫颈癌早期筛查中的优劣势。结果：宫颈脱落细胞DNA定量分析的敏感度、特异度、准确度分别为61.29%，67.52%，73.81%；液基细胞学检查为77.95%，62.33%，60.57%；杂交捕获HPV为86.33%，92.15%，90.21%。结论：宫颈脱落细胞DNA定量分析的敏感度、特异度、准确度均不高，需与液基细胞学检查或杂交捕获HPV联合应用，以提高宫颈癌的诊断率，以早期治疗疾病，提高治疗效果。
【关键词】 DNA定量分析； 液基细胞学检查； 杂交捕获HPV； 宫颈癌； 早期筛查
宫颈癌是妇女最常见的恶性肿瘤，我国每年新发病例约3万人，占世界宫颈癌新发病例的28.8%，为我国妇女恶性肿瘤第1位。对已婚妇女定期进行宫颈癌筛查是最有效控制宫颈癌的途径，如何选择高效、合理、规范、经济的筛查方法是当前亟待解决的问题[1]。DNA定量分析方法、液基细胞学检查、杂交捕获HPV是用于宫颈癌诊断的常用方法，现将三种方法在宫颈癌早期筛查中的优劣性进行分析，并据此找出最佳的筛查手段。
1 资料与方法
1.1 一般资料 2010年4月-2012年4月中山市人民医院妇产科行常规妇检患者1000例，年龄22～68岁，平均年龄(46.19±10.28)岁；其中<30岁124例，31～40岁284例，41～50岁315例，51～60岁255例，>61岁22例；所有患者均无子宫切除史、无身孕、无盆腔放射治疗史。
1.2 研究方法 所有患者进行宫颈脱落细胞DNA定量分析方法、液基细胞学检查、杂交捕获HPV三种方法检测。结果异常时，于阴道镜下行宫颈定位活检。病理为金标准，并作组间比较。分析其相关性及各组和相互联合检查在宫颈癌早期筛查中的优劣势。
1.3 检测方法
1.3.1 DNA定量分析方法 用DI代表细胞核的DNA含量，正常DI数值1～2，即2C～4C细胞。以Auer等的标准为依据，下列情况为不正常：DI>2.5，DI在1.5～2.5的3C、4C细胞，出现非整倍体细胞峰。
1.3.2 液基薄层细胞学方法 经巴氏染色制片，按照2001年TBS报告系统为标准，分为以下五个级别：正常或良性，不明意义的非典型鳞状上皮，低级别鳞状上皮内病变，高级别鳞状上皮内病或原位癌，鳞状上皮浸润癌。
1.3.3 杂交捕获HPV检测方法 将标本离心后，取沉淀物用聚合酶链反应(PCR)检测标本中的HR-HPV DNA，检测目前已知的13种HR-HPV DNA(即16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68)。标本DNA>1.0 ng/L为阳性[2]。
1.4 统计学处理 采用SPSS 13.0统计学软件对数据进行分析，计数资料组间比较采用 字2检验，以P<0.05为差异具有统计学意义。
2 结果
宫颈脱落细胞DNA定量分析的敏感度、特异度、准确度分别为61.29%，67.52%，73.81%；液基细胞学检查为77.95%，62.33%，60.57%；杂交捕获HPV为86.33%，92.15%，90.21%。见表1。
*与DNA定量分析方法比较，P<0.05
3 讨论
传统宫颈涂片检查是宫颈癌筛查最常用的检查方法之一，但该方法容易出现假阴性，诊断的准确率不高。全自动细胞DNA定量分析系统在传统宫颈涂片的基础上进行了改进，细胞制片和细胞阅片分析技术显著提高。其原理为正常细胞(即DNA二倍体细胞)或肿瘤细胞在增殖时，细胞核内的DNA结构和含量都会发生变化。通过测定DNA的周期变化，能够发现发生恶性增殖的肿瘤细胞。但DNA的含量无法直接用细胞图像系统进行分析和测量，故先对细胞核染色，再用显微镜进行测定，同时用DI进行计量测定。DI=被测细胞DNA含量的数字/正常细胞DNA含量在G0/G1期间峰值的数字[3]。宫颈脱落细胞DNA定量分析与传统宫颈涂片方法比较，灵敏度、特异度以及准确度均得到提高，但是细胞核的DNA含量容易受病理、化学、物理等因素的影响，如病毒感染、VitB12缺乏、放射线等，引起DNA含量的变化，因此，DNA定量分析仍不能达到准确诊断宫颈癌的要求。
液基细胞学检查技术也是在传统巴氏涂片检测方法的基础上发展起来的，是在标本取出后立即浸入细胞保存液中，有效避免了细胞过度干燥和丢失引起的误差，将保存液中的细胞进行程序化处理，可做到薄层涂片均匀一致，方便了镜下观察，提高了宫颈异常细胞的检出率，降低了假阴性的发生率，提高了灵敏度、特异度和准确度。本文研究中，液基细胞学检查的敏感度高于DNA定量分析，但特异度和准确度低于DNA定量分析，可将两者联合应用，以提高诊断结果的准确性。
研究已经证明，HPV病毒感染是导致宫颈癌的重要因素，杂交捕获HPV-DNA检测是HPV基因分型检测的新方法，并且HPV感染的阳性率随宫颈上皮内病变程度的增加而增高，在宫颈癌发展的预测上有更大的作用[4]。本文研究显示，杂交捕获HPV的灵敏度、特异度及准确度均显著高于DNA定量分析，说明杂交捕获HPV-DNA在诊断宫颈癌方面具有一定的优势，但是由于其价格较为昂贵 ......
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