乙型肝炎病毒感染与TGF—β1和TNF—α的相关性研究(1)
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【摘要】 目的：探讨HBV感染与TGF-β1和TNF-α的相关性。方法：酶联免疫吸附法(ELISA)检测慢性乙型肝炎患者血清TGF-β1和TNF-α水平；免疫组化法检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎核心抗原(HBcAg)、TGF-β1和TNF-α的表达。结果：HBV感染者血清TGF-β1和TNF-α明显高于对照组，差异有统计学意义。肝组织TGF-β1和TNF-α表达明显增强，与非HBV感染组相比，差异有统计学意义。结论：HBV感染与TGF-β1和TNF-α水平密切相关，可以作为诊断和治疗的一个判断指标。
【关键词】 乙型肝炎病毒； 转化生长因子β1； 肿瘤坏死因子α； 相关性
转化生长因子-β(transforming growth factor-β， TGF-β)是一组新型的细胞因子，包括三种功能相似的TGF-β1、β2和β3。其中TGF-β1还与原癌基因表达相关[1]。肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor alpha， TNFα)是一种主要由巨噬细胞和单核细胞产生的促炎细胞因子，并参与正常炎症反应和免疫反应。TNFα在许多病理状态下产生增多，包括败血症、恶性肿瘤、心脏衰竭和慢性炎性疾病[2]。有关慢性乙型肝炎患者与TGF-β1和TNF-α水平相关性以及肝组织中TGF-β1和TNF-α表达水平的报道不多[3-4]。为此，本实验采用ELISA法检测乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus，HBV)阳性和阴性患者血清中TGF-β1和TNF-α的水平，用免疫组织化学法对肝病患者肝组织和正常肝组织中的HBV的便面抗原(Hepatitis B surface antigen，HBsAg)和核心抗原(Hepatitis B core antigen，HBcAg)以及TGF-β1和TNF-α在肝组织中的表达，以探讨两者与HBV感染的相关性。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 血清标本 分为两组，即HBV感染组和正常对照组。HBV感染组来源于本中心门诊及住院患者，HBV血清学阳性，排除其他疾病，确定为HBV感染者共46例，其中男31例，女15例，平均年龄31岁。正常对照组为本中心门诊体检者，排除其他重大疾病，HBV血清检测阴性，共20例，平均年龄33.1岁。两组间性别、年龄差异无统计学意义。各组均抽取空腹不抗凝静脉血，血块凝缩后以3000 r/min速度离心15 min，取上清液放置于-20℃冰箱冻存备用。
1.1.2 肝脏组织标本 收集病理科2000-2009年手术切除肝组织存档蜡块及肝活检标本共46例。通过免疫组化染色，按HBV的血清标志物便面抗原HBsAg和核心抗原HBcAg是否显色作为感染标准，从而分为HBV阳性肝组织标本与HBV阴性两组。
1.2 方法
1.2.1 血清TGF-β1和TNF-α的检测 采用酶联免疫吸附法(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay， ELISA)，按试剂盒说明书操作(试剂盒购自深圳晶美生物技术有限公司)。
1.2.2 免疫组化染色检测 TGF-β1单克隆抗体、HBcAg多克隆抗体、HBsAg单克隆抗体以及S-P试剂盒均购自福州迈新公司，TNF-α单克隆抗体购自北京中山公司。免疫组化详细步骤按试剂说明书要求进行。结果判断 以HBsAg和HBcAg阳性确定HBV 感染。TNF-α、TGF-β1根据细胞显色程度及阳性比例来评分[5]。
1.3 统计学处理 用SPSS统计软件进行数据处理，计量资料比较采用t检验和直线相关分析。计数资料采用 字2检验。以P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
2.1 血清TGF-β1和TNF-α的检测 结果正常人和慢性乙型肝炎患者血清中TGF-β1和TNF-α的含量见表1。
2.2 乙型肝炎表面抗原HBsAg和核心抗原HBcAg的表达 免疫组化染色结果显示，HBsAg主要表达在胞浆，也可见于胞膜，或同时表达。HBcAg则只要表达与胞核，在胞膜也可见表达(见图1)。 HBV感染组中慢性乙型肝炎全都见HBsAg和(或)HBcAg表达。
2.3 HBV阳性与HBV阴性组织中的TGF-β1和TNF-α表达的比较 HBV阳性组与HBV阴性组之间TGF-β1、TNF-α表达有差异，见表2。TGF-β1的阳性程度较强，主要表达部位是胞浆，在肝细胞、窦内皮细胞、胆管细胞均可见表达。TNF-α的阳性表达程度相对较弱，主要表达在肝细胞、窦内皮细胞和单核细胞 (图2)。由表2可以看出，HBV阳性与HBV阴性组间TGF-β1和TNF-α的表达差异有统计学意义(P<0.05)。
3 讨论
TGF-β1是一种具有多功能生物活性的细胞因子，因其能促进成纤维细胞的转化生长而得名，对细胞的生长、分化和多种生理、病理过程起重要调节作用。而且对不同细胞表现作用也有不同，如TGF-β诱导成纤维细胞中c-sis基因表达，与促进其在软琼脂中生长有关；而对上皮角朊细胞生长的抑制则与抑制c-myc基因表达有关[6-7]。也有研究证明，许多肿瘤细胞可通过自分泌或旁分泌TGF-β1来抑制旁细胞的生长，而促进肿瘤细胞的生长，从而显示TGF-β1在肝癌的发生中发挥了重要作用[8]。本研究结果显示，慢性乙型肝炎患者血清TGF-β1水平显著地高于正常人组(P<0 ......
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