MHV—3诱导小鼠暴发性肝炎模型中γδT细胞的抑制性受体表达(2)
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2.3 小鼠肝脏病理学变化 分别选取未处理小鼠肝脏、腹腔注射生理盐水对照组的小鼠肝脏，暴发性肝炎模型48 h的小鼠肝脏进行病理学检查。腹腔注射生理盐水对照组的小鼠肝脏病理切片图与未处理组的肝脏切片相似；感染MHV-3，48 h后肝脏病理切片示肝细胞有较多的核分裂，有较多的中性粒细胞浸润，局部呈小灶性炎症细胞浸润，其周围有大量肝细胞死亡(符合重型肝炎病理学诊断)见图3。
2.4 γδT细胞广泛存在于MHV-3感染前后小鼠肝脏内。已有研究表明γδT可以广泛存在于机体免疫器官，γδT细胞作为重要的天然免疫细胞，发挥着重要作用。如图4所示，MHV-3感染前后，小鼠肝脏内均存在一定数量的γδT细胞。
2.5 NKG2A持续低水平表达 检测肝脏中γδT细胞表达γδT细胞抑制性受体NKG2A的比例， 以及抑制性受体NKG2A的平均荧光强度。流式细胞检测后发现感染MHV-3 48 h，小鼠肝脏γδT细胞表达NKG2A的细胞比例基本未发生变化，但是其活化受体NKG2A的平均荧光强度持续低水平表达(图5)，另外NKG2A iso染色，排除非特异性染色。
3 讨论
在MHV-3诱导小鼠暴发性肝炎模型中，小鼠感染病毒72小时开始出现死亡，直至120 h时，感染组小鼠全部死亡。该模型较好的反应了暴发性肝炎(肝炎重症化)的预后。另外综合小鼠外周血清ALT、AST含量变化与小鼠肝脏HE病理切片，选取48 h为该模型实验观察关键时间点，具有合理性。γδT细胞表面可以表达多种调节性受体，其中NKG2A是重要的抑制性受体。当NKG2A表达增高，γδT即被抑制，作为重要的免疫细胞，在天然免疫阶段发挥重要作用。当NKG2A在γδT细胞上持续低水平表达，受机体负调控机制缺失，导致γδT细胞可抑制性低下，γδT细胞可以被其他免疫调节细胞快速激活，而无法维持免疫稳态。因此，笔者用流式细胞技术检测小鼠肝脏非实质细胞γδT细胞以及其表面NKG2A表达。在现有现代免疫学技术条件下，该方法广泛应用于细胞表面标志物检测，得到广大国际同行认可。检测后，发现γδT细胞活化受体NKG2A的平均荧光强度持续低水平表达。此现象可能与重症肝炎预后较差有一定的联系。然而本实验仍有一定不足，如该小鼠模型仍不能完全等同于人类重症肝炎病理生理变化，其细胞表面标志物的表达是否与人类细胞有共性，以及细胞染色技术是否完全成熟，实验技术年代性局限等问题有待今后实验进一步完善。
重型肝炎是一类病死率甚高、严重威胁人们健康的肝脏疾病。我国病毒性肝炎防治方案(试行)将重型肝炎分为急性、亚急性和慢性重型肝炎。其中急性重型肝炎发病急，病死率高，研究其发病机制，治疗以及预后转归具有重要的临床意义。
γδT细胞作为一种有独特构成和独特功能的T细胞，近年来的研究不断升温[4]。如今，对于γδT细胞的抗原识别方式和无MHC限制性已达成共识[5]。但是，γδT细胞作为一群具有的效应功能的免疫细胞，其调控机制尚不明确。γδT细胞是固有免疫的效应性细胞，在病毒性感染疾病如柯萨奇病毒B3( cox sack ievirusB 3， CVB3)、巨细胞病毒(Cy tomegalovirus， CMV ) 等发挥着重要作用[6-7]。因此，研究γδT的调控机制，对疾病的发病机制，生理病理学研究、疾病的治疗、疾病的转归、以及疾病的预防具有非常重要的意义[8-9]。在慢性病毒性肝炎小鼠模型中，γδT细胞可以大量杀伤肝脏细胞，因此，研究该细胞活化机制，对研究人类肝炎病毒诱发急性肝衰竭的发病机制，治疗方法有十分重要的意义。NKG2A作为γδT细胞表面重要的抑制性受体，表达的高低对于预后有一定的意义[10]。本研究表明，在小鼠暴发性肝炎(MHV-3)中，感染小鼠肝脏内γδT细胞表达NKG2A的细胞数量以及强度持续低水平表达。该实验提示，γδT细胞作为重要的天然免疫细胞，如能在暴发性肝炎早期，通过药物、基因调控、细胞治疗等方法提高γδT细胞表达NKG2A，则可能为疾病的治疗提供重要的方法。
参考文献
[1] Lu Y， Wang X， Yan W， et al. Liver TCRγδ(+) CD3(+) CD4(-) CD8(-) T cells contribute to murine hepatitis virus strain 3-induced hepatic injury through a TNF-α-dependent pathway[J]. Mol Immunol，2012 ，52(3-4)：229-36.
[2] Wang L， Kang N， Zhou J， et al. Downregulation of CD94/NKG2A inhibitory receptor on decreased γδ T cells in patients with systemic lupus erythematosus[J]. Scand J Immunol， 2012 ，76(1)：62-9.
[3] Foureau DM， McKillop IH， Jones CP， et al. Skin tumor responsiveness to interleukin-2 treatment and CD8 Foxp3+ T cell expansion in an immunocompetent mouse model[J]. Cancer Immunol Immunother， 2011，60(9)：1347-56.
[4] Ge SJ， Duan LN， Luo Y， et al.Expression of NKG2D and NKG2A with their ligands MHC-I A/B and HLA-E in acute leukemia patients and its significance[J] ......
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