石蜡包埋大肠癌肿瘤浸润淋巴细胞FCM单细胞悬液样本的制备(1)
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【摘要】 探讨石蜡标本中大肠癌肿瘤浸润淋巴细胞亚群单细胞悬液样本的制备方法。石蜡标本经切片、脱蜡、水化、消化、过滤、收集细胞等步骤制成单细胞悬液，滴加单克隆抗体，通过流式细胞仪检测，最后进行淋巴细胞亚群细胞分型获取及读数。
【关键词】 大肠癌； 肿瘤浸润淋巴细胞； 石蜡包埋； 流式细胞术
肿瘤浸润淋巴细胞(Tumor Infiltrating Lymphocytes，TIL)在体内外具有较强特异性杀伤肿瘤细胞的作用[1-2]。以往对肿瘤浸润淋巴细胞的研究多从病理角度探讨，对其淋巴细胞分型及量的表达研究甚少。随着免疫检测技术的发展，特别是流式细胞术(flow cytometry，FCM)应用于免疫研究越来越广泛，并具有快捷、敏感及多参数定量分析等优点，目前这种检测技术主要应用于临床新鲜肿瘤组织和血液细胞研究[3-6]。近年来石蜡包埋组织单细胞分散方法的建立，扩大了流式细胞术的应用范围，临床病理资料的石蜡组织通过流式细胞术检测分析，得到进一步的研究及利用。在石蜡包埋大肠癌肿瘤浸润淋巴细胞亚群样本制备国内外文献鲜有报道，本实验选取1990年6月-2006年6月本院60例石蜡包埋大肠癌组织，反复对大肠癌肿瘤淋巴单细胞悬液的制备方法进行探索，获得了比较满意的效果。
1 材料与方法
1.1 实验材料 选取本院普通外科1990年6月-2006年6月收集的大肠石蜡标本组织共60例，标本组织均为病理证实的大肠癌组织，并进行单细胞悬液的制作。
1.2 方法
1.2.1 切片 将石蜡包埋组织切成40 μm厚的组织片，取7～8片放入10 mL试管中。
1.2.2 脱蜡 加入二甲苯5 mL，室温中放置2 d，每天更换一次二甲苯，观察石蜡是否脱净，如组织切片全部在试管底部 ......
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