真核表达载体pcDNA3.1—Beclin1的构建及其对子宫内膜癌HEC细胞增殖的影响(2)
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1.3 统计学处理 用统计学软件SPSS 13.0对数据进行统计学分析，Western blot法测量结果采用重复测量方差分析(ANOVA)；计量资料用(x±s)表示，比较采用t检验，计数资料采用 字2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 Beclin1基因扩增 T/A克隆PCR扩增，从人子宫内膜癌HEC细胞提取，经鉴定其纯度和完整性均较好，PCR扩增产物电泳得到约326 bp的特异条带，与预期扩增片段大小相符，见图1。
2.2 重组载体鉴定结果 将构建的pcDNA3.1-Beclin1重组质粒进行测序鉴定，测序结果与设计一致，见图2。
2.3 转染HEC细胞中pcDNA3.1-Beclin1表达测定 分别提取转染组、空载体组及对照组HEC细胞总蛋白，Western blot检测发现转染组条带明显增粗，提示有外源的Beclin1高表达，见图3。用荧光显微镜观察，发现在转染数小时后即可见到部分细胞表达Beclin1，在4 h之内表达Beclin1的HEC细胞数量逐渐增多，在48 h达到高峰，其pcDNA3.1-Beclin1转染细胞内出现大量明亮的绿色荧光，阴性对照组(空载体组)荧光表达百分率约为4.8%，转染组荧光表达百分率约为72.0%，瞬时转染效率70.0%，可以满足实验需要，见图4。
2.4 MTT检测转染HEC细胞增殖状态 MTT结果显示，pcDNA3.1-Belin1转染组与阴性对照组(脂质体组)及pcDNA3.1空载体组间HEB细胞相比吸光度值差异均有统计学意义(P<0.05)；阴性对照组织(脂质体组)与空载体对照组HEC细胞相比，吸光度值差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。描绘细胞曲线显示转染pcDNA3.1-Beclin1载体的子宫内膜癌HEC细胞生长有明显抑制，实验组织HEC细胞增殖明显低于对照组。
3 讨论
Beclin1位于人类染色体17q21上 ......
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