HMGB1基因多态性与HBV相关性肝癌的关联性研究(2)
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参见附件。
1 资料与方法
1.1 一般资料 426例HBV感染者均为本院门诊及住院患者，男334例，女92例，年龄(42.15±11.87)岁，均为汉族，且无亲缘关系。所有病例诊断符合2005年中华医学会肝病与感染病学分会修订的病毒性肝炎诊断标准，同时排除HIV、TP及其他肝炎病毒感染。样本收集均获患者知情同意。按疫病类型将患者分为四组，其中乙肝病毒携带组98例，男62例，女36例；慢性乙型肝炎组116例，男92例，女24例；乙肝硬化组102例，男86例，女16例；乙肝肝癌组110例，男86例，女24例。
1.2 基因组DNA的提取 采用硅胶柱纯化方式，从700 ?L抗凝血液中提取淋巴细胞基因组DNA。UV计测定DNA浓度及纯度，并将样本稀释至10 ng/?L，分装保存。
1.3 PCR-RFLP 从SNPs数据库下载SNP的标准序列，Primer Premier 6.0软件设计引物：上游：5’-3’CCTTTGCCCAGTGTATC，下游：5’-3’TGTATGCCAAGCCATTTG(上海英潍捷基公司合成)，内切酶BclI位点T/GATCA(NEB公司提供)。PCR反应条件：95 ℃预变性3 min，94 ℃变性30 s，55 ℃退火45 s，72 ℃延伸30 s，循环次数35次，72 ℃延迟5 min结束PCR反应。产物37 ℃过夜酶切，65 ℃ 30 min，终止反应。2%琼脂糖凝胶电泳分离酶切产物，送上海英潍捷基公司测序验证。
1.4 统计学处理 SPSS 17.0软件进行数据处理，计算等位基因频率和基因型频率，Hardy-Weinberg平衡检验及各组间比较均采用 字2检验 ......
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