碳纳米管丙氨瑞林对人子宫内膜癌细胞裸鼠皮下移植瘤生长及对Smurf2表达的影响(2)
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1 材料与方法
1.1 细胞系和动物模型 人子宫内膜癌Hec-1-B细胞株(中国医学科学院基础医学研究所)，24只BALB/C nu/nu裸鼠，5～6周龄，体重为16～20 g，雌性(国家噬齿类种子中心-中国药品生物制品检验所实验动物中心，许可证号：scxk(京)2009-0017)，于无特定病原体(SPF，Specific pathogen free)环境饲养、提供。
1.2 主要药物和试剂 醋酸丙氨瑞林(alarelin acetate for injection)(上海静融生物科技有限公司)；碳纳米管、碳纳米管丙氨瑞林(太原理工大学新材料工程技术研究中心)；Smurf2免疫组化试剂盒(武汉博士德生物制品有限公司)。
1.3 细胞培养 根据胰消化培养法，人子宫内膜癌细胞株Hec-1B细胞采用高糖DMEM培养基(含10%胎牛血清、100 U/mL庆大霉素等)，置于CO2培养箱中进行培养(含5%CO2、PH 7.2、环境温度为37 ℃)。消化、离心并收集处于对数期的Hec-1B细胞，制成终浓度为1.6×107/mL的单细胞Hec-1B悬液以备构建模型用。
1.4 裸鼠皮下移植瘤模型的制备及其生长状况检测 将24只荷瘤裸鼠(无特定病原体(SPF)环境下饲养)置于超净台内进行接种。碘酊局部皮肤消毒裸鼠左侧腋窝皮下，一次性无菌注射器抽取子宫内膜癌细胞株Hec-1-B细胞悬液0.5 mL(约含8.0×106个细胞)，注射至裸鼠皮下。连续观察1周，待皮下成瘤直径达0.5 cm时，将24只裸鼠随机分为4组进行干预，每组6只，分别为生理盐水组(即对照组)、碳纳米管组、丙氨瑞林组(30 μg/kg)、碳纳米管丙氨瑞林组(碳纳米管的用量按丙氨瑞林剂量30 μg/kg折算) ......
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