大电导钙激活钾通道β1亚基与子痫前期的相关性研究(2)
| 第1页 |
参见附件。
1.2.2 标本采集 术前抽取所有孕妇空腹静脉血并分离血清保存，以检测血清中KCNMβl的浓度。剖宫产术中取胎盘组织约2 cm×2 cm×2 cm大小，再取一块子宫平滑肌各约1 cm×1 cm×1 cm大小，分别置于EP管中，冷冻保存以提取RNA。
1.2.3 实验方法 (1)血清KCNM βl测定：采用ELISIA法，于回归方程上计算所测样本的OD值所对应的样品浓度。所有标本同批测定，批内变异<6%。(2)子宫平滑肌组织和胎盘组织中的KCNMβl mRNA的提取及测定：所取到的组织通过荧光定量PCR法测定总RNA，严格按照试剂盒操作进行检测。取波长260 nm及280 nm的紫外分光光度计检测总RNA样品的纯度及浓度，并稀释后经l.2%琼脂糖凝胶电泳检测，紫外线下得到完整的5S、18S及28S三条RNA条带。(3)荧光定量PCR：PCR引物参考国内外的相关文献，设计KCNM βl的PCR引物序列，并与Gene Bank中的基因谱一一核对无误。PCR引物序列及长度见表1。引物稀释至浓度为20 ?mol/L，在Microtube管中配制反转录反应液(详见表2)，并在PCR仪上进行反转录反应。按表1.4配制PCR反应液，进行荧光定量PCR反应。荧光定量PCR反应体系：SYBR Primix Ex TaqTMⅡ 10 μL、上下游引物各0.8 μL，超纯水6.4 μL，cDNA产物2.0 μL；PCR扩增条件为：(1)预变性95 ℃、30 s，1个循环；(2)95 ℃、5 s，60 ℃、20 s，40个循环；(3)95 ℃、0 s，65 ℃、15 s，95 ℃、0 s。荧光定量PCR检测得到各基因引物的标准曲线和扩增效率 ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件。