传统细菌培养法与荧光PCR法分离公共场所嗜肺军团菌结果比较(2)
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1.3.3 传统培养法 按卫监督发[2006]第58号《公共场所集中空调通风系统卫生规范》进行传统培养。
1.3.4 荧光定量PCR法测定 (1)核酸提取方法：DNA提取采用全自动核酸提取仪，按MeDiPro SuperPure System-32操作步骤说明进行。纯化核酸的析出溶液放入经高温高压灭菌及RNase-free的干净EP管中；嗜肺军团菌荧光PCR试剂盒，依据试剂盒操作说明书进行。(2)荧光定量PCR扩增体系和反应条件：总反应体系为25 ?L，包括PCR反应液19.5?L，混合酶液(Tap酶+UNG酶)0.5 ?L，模板DNA 5 ?L；反应条件为UNG处理(50 ℃ 2 min)1个循环；预变性(95 ℃ 3 min)1个循环，PCR 95 ℃ 5 s，55 ℃ 60 s，40个循环(此阶段结束时采集荧光信号)。(3)荧光定量PCR结果判定：荧光定量PCR检测以Ct值<30，并且扩增曲线呈S型为阳性判定原则；Ct值30～35需要重复实验，2次实验均能得到良好S型扩增曲线方可判定为阳性；Ct值>35或无Ct值为阴性。
1.4 统计学处理 应用PEMS 3.1统计学软件对数据进行处理，计数资料比较采用 字2检验，以P<0.05表示差异有统计学意义
2 结果
234份(水样88份，土壤146份)样品中，传统细菌培养法检出嗜肺军团菌9份(主要类型为Lp1)，检出率为3.85%；而实时荧光定量PCR法检出47份(主要类型为Lp1)，检出率为20.08%。荧光定量PCR法总检出率明显高于传统细菌培养法，有较好的灵敏性(P<0.05)，见表1。
3 讨论
在我国的大中城市，随着集中空调系统和供水系统的广泛应用，军团菌病的暴发或者流行的危险性也越来越大。国内文献显示我国不同城市的军团菌检出率差别较大，北京市在1998-2006年的公共场所军团菌检出率达14.07%[5]。上海市在2009年医院嗜肺军团菌检出率达到17.1%[6]，广州市2006-2010年公共场所的嗜肺军团菌检出率为15 ......
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