1.5 药敏试验 采用K-B纸片法，选取含5%绵羊血的琼脂平板上18～20 h培养物，用M-H 肉汤或0.9% NaCl溶液直接调制成相当于0.5号麦氏浊度菌悬液，制备好的接种菌液必须在15 min内使用。用灭菌棉拭子蘸取菌液，在管壁上旋转挤压几次，去掉过多的菌液。用拭子在含5%绵羊血的MH平板琼脂表面均匀涂抹接种3次，每次将平板旋转60°，最后沿平皿周边绕两圈，保证均匀涂布满整个培养基表面。孵育条件为5% CO2，(35±2)℃，孵育20～24 h。对苯唑西林的抑菌环直径≥20 mm，为肺炎链球菌对青霉素敏感，抑菌环直径≤19 mm的肺炎链球菌不能报告青霉素耐药，应进行确认试验，本文采用青霉素的E-test试验。质控菌株采用肺炎链球菌ATCC49619，结果判定按2014版CLSI标准进行[7]。

    1.6 E-test试验 即抗生素浓度梯度法，0.5号麦氏浊度菌悬液制备和5%绵羊血的MH平板琼脂表面涂抹菌悬液同K-B纸片扩散法，取青霉素的E-test试验药敏片，正面朝上贴到含5%绵羊血的MH平皿培养基表面，为了使药敏片与培养基紧密相贴，可用镊子轻按几下药敏片。5% CO2，(35±2)℃ ......