狼毒多糖对TNF—α诱导的内皮细胞P—selectin表达的影响(1)
【摘要】 目的：探讨狼毒多糖(EFP-AW1)对TNF-α诱导的内皮细胞P-selectin表达的影响。方法：以TNF-α诱导HUVECs建立内皮细胞分泌P-selectin模型，流式细胞术检测EFP-AW1对TNF-α诱导的HUVECs细胞P-selectin蛋白表达的影响；Real-time PCR检测EFP-AW1对TNF-α诱导的HUVECs细胞P-selectin mRNA表达的影响。结果：HUVECs经TNF-α刺激后P-selectin表达较空白对照组明显增强(P<0.05)，而经过EFP-AW1预处理的HUVECs P-selectin mRNA和蛋白表达水平与TNF-α刺激组比较明显降低(P<0.05)，并具有一定的剂量依赖性。结论：EFP-AW1能够降低TNF-α诱导的内皮细胞黏附分子P-selectin表达，从而抑制P-selectin介导的肿瘤细胞与内皮细胞的黏附。
【关键词】 狼毒多糖； P-selectin； TNF-α
Effect of Euphorbia Fischeriana Polysaccharide on the P-selectin Expression in HUVECs Induced by TNF-α/JIANG Li-yan，YU Zhi-pu，SONG Bo.//Medical Innovation of China，2015，12(12)：008-010
, 百拇医药
【Abstract】 Objective：To observe the effect of Euphorbia fischeriana polysaccharide (EFP-AW1) on the P-selectin expression in HUVECs induced by TNF-α.Method：HUVECs were divided into normal group，TNF-α stimulation group and EFP-AW1 and TNF-α associated stimulation group.Flow cytometry was used to measure the level of P-selectin protein in HUVECs cell； and Real-time PCR were applied to assay status of P-selectin mRNA expression in HUVECs cell.Result：TNF-α stimulation group had significantly increased the levels of P-selectin mRNA and protein(P<0.05).Compared with the group stimulated of TNF-α，the expression of P-selectin mRNA and protein in HUVECs cell had apparently decreased by pre-treated with EFP-AW1(P<0.05)，and had a certain dose dependent.Conclusion：EFP-AW1 could inhibit the expression of P-selectin induced by TNF-α in endothelial cells.
, 百拇医药
【Key words】 Euphorbia fischeriana polysaccharide； P-selectin； TNF-α
First-author’s address：Qiqihar Medical University， Qiqihar 161000， China
doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2015.12.003
转移是恶性肿瘤主要生物学特征之一，也是癌症患者死亡及远期疗效差的主要因素[1]，是一个多分子参与的极为复杂的过程[2]，细胞黏附为关键步骤之一，黏附过程涉及选择素(selectin)、整合素(integrin)、钙黏素(cadherin)等多种黏附分子[3]。P-选择素是细胞黏附分子家族的重要成员之一，在介导多种肿瘤细胞与内皮细胞间的黏附起了非常重要的作用[4-5]。因此，抑制P-selectin表达可能是治疗肿瘤转移的有效方法[6]。
, 百拇医药
狼毒多糖(EFP-AW1)是本实验室从狼毒大戟根部新发现并提取的低分子多糖化合物[7]，课题组前期研究证明其能够抑制人大细胞肺癌细胞NCI-H460与人脐静脉内皮细胞HUVECs的黏附，本试验以TNF-α诱导HUVECs 建立内皮细胞分泌P-selectin模型，研究狼毒多糖(EFP-AW1)对TNF-α诱导的内皮细胞P-selectin表达的影响，探讨EFP-AW1是否能够通过降低P-selectin的表达而抑制肿瘤细胞与内皮细胞的黏附。
1 材料与方法
1.1 实验材料 狼毒大戟购买于齐齐哈尔市药材公司，EFP-AW1为本实验室从中药狼毒大戟中新发现并分离提取的低分子多糖化合物[7]，分子量为10.830 Da；人脐静脉内皮细胞HUVECs购于美国ATCC细胞库；用于培养细胞的RPMI1640培养基和胎牛血清(FCS)均为HyClone产品；肿瘤坏死因子-α(TNF-α)购于R&D公司。FITC标记的P-selectin鼠抗人单克隆抗体(BD公司)；Trizol(TaKaRa公司)；SYBR?ExScriptTMRT-PCR Kit(TaKaRa公司)；引物合成由上海生工生物工程有限公司完成。
1.2 方法
1.2.1 细胞培养及分组 人脐静脉内皮细胞HUVECs培养于含10%胎牛血清的RPMI1640培养液中，补充100 U/mL青霉素和100 μg/mL链霉素，置于5%CO2，37 ℃饱和湿度的CO2培养箱中培养，至细胞铺满瓶壁80%～90%传代，取5～6代的细胞用于实验，并将细胞分为五组，分别为空白对照组、TNF-α刺激组、EFP-AW1低剂量组、EFP-AW1中剂量组、EFP-AW1高剂量组。实验组细胞分别加入不同剂量EFP-AW1(5、10 μg/mL和20 μg/mL)，作用48 h后，除空白对照组外均加入10 ng/mL TNF-α，37 ℃刺激2 h，收集细胞进行以下实验。, http://www.100md.com(蒋丽艳 于智浦 宋波)
【关键词】 狼毒多糖； P-selectin； TNF-α
Effect of Euphorbia Fischeriana Polysaccharide on the P-selectin Expression in HUVECs Induced by TNF-α/JIANG Li-yan，YU Zhi-pu，SONG Bo.//Medical Innovation of China，2015，12(12)：008-010
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【Abstract】 Objective：To observe the effect of Euphorbia fischeriana polysaccharide (EFP-AW1) on the P-selectin expression in HUVECs induced by TNF-α.Method：HUVECs were divided into normal group，TNF-α stimulation group and EFP-AW1 and TNF-α associated stimulation group.Flow cytometry was used to measure the level of P-selectin protein in HUVECs cell； and Real-time PCR were applied to assay status of P-selectin mRNA expression in HUVECs cell.Result：TNF-α stimulation group had significantly increased the levels of P-selectin mRNA and protein(P<0.05).Compared with the group stimulated of TNF-α，the expression of P-selectin mRNA and protein in HUVECs cell had apparently decreased by pre-treated with EFP-AW1(P<0.05)，and had a certain dose dependent.Conclusion：EFP-AW1 could inhibit the expression of P-selectin induced by TNF-α in endothelial cells.
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First-author’s address：Qiqihar Medical University， Qiqihar 161000， China
doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2015.12.003
转移是恶性肿瘤主要生物学特征之一，也是癌症患者死亡及远期疗效差的主要因素[1]，是一个多分子参与的极为复杂的过程[2]，细胞黏附为关键步骤之一，黏附过程涉及选择素(selectin)、整合素(integrin)、钙黏素(cadherin)等多种黏附分子[3]。P-选择素是细胞黏附分子家族的重要成员之一，在介导多种肿瘤细胞与内皮细胞间的黏附起了非常重要的作用[4-5]。因此，抑制P-selectin表达可能是治疗肿瘤转移的有效方法[6]。
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狼毒多糖(EFP-AW1)是本实验室从狼毒大戟根部新发现并提取的低分子多糖化合物[7]，课题组前期研究证明其能够抑制人大细胞肺癌细胞NCI-H460与人脐静脉内皮细胞HUVECs的黏附，本试验以TNF-α诱导HUVECs 建立内皮细胞分泌P-selectin模型，研究狼毒多糖(EFP-AW1)对TNF-α诱导的内皮细胞P-selectin表达的影响，探讨EFP-AW1是否能够通过降低P-selectin的表达而抑制肿瘤细胞与内皮细胞的黏附。
1 材料与方法
1.1 实验材料 狼毒大戟购买于齐齐哈尔市药材公司，EFP-AW1为本实验室从中药狼毒大戟中新发现并分离提取的低分子多糖化合物[7]，分子量为10.830 Da；人脐静脉内皮细胞HUVECs购于美国ATCC细胞库；用于培养细胞的RPMI1640培养基和胎牛血清(FCS)均为HyClone产品；肿瘤坏死因子-α(TNF-α)购于R&D公司。FITC标记的P-selectin鼠抗人单克隆抗体(BD公司)；Trizol(TaKaRa公司)；SYBR?ExScriptTMRT-PCR Kit(TaKaRa公司)；引物合成由上海生工生物工程有限公司完成。
1.2 方法
1.2.1 细胞培养及分组 人脐静脉内皮细胞HUVECs培养于含10%胎牛血清的RPMI1640培养液中，补充100 U/mL青霉素和100 μg/mL链霉素，置于5%CO2，37 ℃饱和湿度的CO2培养箱中培养，至细胞铺满瓶壁80%～90%传代，取5～6代的细胞用于实验，并将细胞分为五组，分别为空白对照组、TNF-α刺激组、EFP-AW1低剂量组、EFP-AW1中剂量组、EFP-AW1高剂量组。实验组细胞分别加入不同剂量EFP-AW1(5、10 μg/mL和20 μg/mL)，作用48 h后，除空白对照组外均加入10 ng/mL TNF-α，37 ℃刺激2 h，收集细胞进行以下实验。, http://www.100md.com(蒋丽艳 于智浦 宋波)