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编号:12605431
当归补血颗粒早期干预结缔组织生长因子防治高血压肾损害及肾血管病变(3)
http://www.100md.com 2015年5月15日 中国医学创新 2015年第14期
     1.3.3.1 组织总RNA的提取 按照用RNeasy Mini Kit试剂盒提取组织总RNA,抽提的总RNA用紫外分光光度计测OD值,比值在1.9~2.0,取3 μL RNA用1%琼脂糖凝胶电泳,可见5、18、28 s 3条清晰的RNA带,提示RNA无污染和降解。

    1.3.3.2 cDNA的合成 按照用逆转录试剂盒合成cDNA,再以此cDNA为模板进行real-time PCR反应操作。Real-time PCR的引物序列如下:β-actin上游5'-GGCCAACCGTGAAAAGATGA-3',下游5'-GACCAGAGGCATACAGGGACAA-3';CTGF上游5'-CCTGTGAAGCTGACCTAGAGGAAA-3',下游5'-ACA-GAACTTAGCCCGGTAGGTCTT-3'。

    1.3.3.3 Real-time PCR检测 在ABI 7900型荧光定量PCR仪上进行扩增,96孔板加样,设计复孔和标准曲线,用Se-quence Detection System软件分析各检测样本的Ct值(达到一定荧光阈值的循环数) ......
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