去卵巢致大鼠腰椎间盘退变模型初探(2)
1.2.2 模型成功的判断依据 阴道细胞涂片:术后24 h开始行阴道细胞涂片,连续5 d。用小滴管吸生理盐水少许,滴于大鼠阴道口内,吸出少量阴道分泌物,涂于载玻片上,立即置于95%的乙醇中固定30 min后取出晾干,做苏木精-伊红染色,光镜下观察。去卵巢后大鼠表现为动情间期,无或者有少量角化上皮细胞,表示去势成功。1.2.3 观察指标与检测 第13周后处死所有大鼠,取出大鼠腰椎部分,剔除椎体周围软组织,经L5/6、L6/S1椎间隙取出椎间盘组织。L5/6椎间盘组织放入4%多聚甲醛溶液中固定,石蜡包埋切片,常规HE染色,显微镜下对其椎间盘组织进行观察,利用Wang等制定的椎间盘组织学评分系统对大鼠椎间盘髓核、纤维环及骨赘的形态学退变程度进行评分,根据退变程度的加剧其得分增加(髓核0~3分,纤维环0~2分,骨赘0~2分),一个椎间盘的得分为这3项得分的总和。同时每个标本随机1个400倍高倍标准视野,进行脊索细胞计数。将所取L6/S1椎间盘组织立即放入2.5%戊二醛溶液中固定24 h;2%的锇酸固定2 h,0.1M二甲砷酸钠冲洗3次,间隔2 h进行一次后过夜;0.1M二甲砷酸钠冲洗2次,间隔2 h进行一次;乙醇梯度脱水,环氧树脂-环氧丙烷混合液浸泡24 h ......
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