PDGF/ROCK通路介导的肌成纤维细胞分化在大鼠矽肺形成中的作用(2)
1 材料与方法1.1 实验动物 SPF级健康成年雄性 Wistar大鼠40只,体重(180±10)g(北京维通利华动物技术有限公司),于河北联合大学实验动物中心屏障实验室饲养(温度20~26 ℃,湿度50%~70%,昼夜交替,自由饮食进水)。
1.2 材料与试剂 标准α石英粉尘(中国疾病预防控制中心);兔抗大鼠α-SMA、ROCK、phospho-PDGFR-β多克隆抗体(美国Epitomics公司);小鼠抗大鼠Ⅰ型、Ⅲ型胶原单克隆抗体(美国 Sigma公司);兔抗大鼠GAPDH多克隆抗体(美国Santa Cruz公司);羊抗小鼠二抗、羊抗兔二抗、DAB显色试剂盒、BCIP/NBT显色试剂盒(武汉博士德生物有限公司)。
1.3 方法
1.3.1 矽肺动物模型建立 将动物随机分为四组,每组10只,乙醚麻醉后采用非暴露式气管插管,按照实验分组支气管内一次性灌注生理盐水或浓度为50 g/L的生理盐水SiO2混悬液。(1)模型对照4周组:支气管内灌注灭菌生理盐水1.0 mL/只,腹腔内埋入注入生理盐水的微量药物释放泵,4周后处死;(2)模型对照8周组:同模型对照4周组处理后于8周后处死;(3)矽肺模型4周组:支气管内灌注SiO2混悬液1.0 mL/只 ......
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