用TrypLE将处于对数生长期的细胞进行消化后，将TrypLE去掉，添加适量的PBS液吹打成单细胞悬液。接种于50 mL细胞培养瓶进行培养，在细胞培养24 h之后，将培养瓶中的细胞悬液移入离心管中并分成CD133同型抗体组和CD133抗体组。将每组细胞以100×g离心5 min，弃上清。CD133同型抗体组加入100 μL的CD133同型抗体稀释液，CD133抗体组加入100 μL的CD133抗体稀释液，静置4 ℃冰箱，避光，孵育30 min。用200目筛网滤过标记好的细胞悬液，用流式细胞仪检测并分选CD133+和CD133-细胞群。

    1.3 CD133+细胞肿瘤干细胞样生物学特性的鉴定

    1.3.1 CD133+细胞体外成球能力检测 用干细胞培养基培养分选获得的CD133+和CD133-细胞亚群，对其体外连续成球能力进行观测。

    1.3.2 CD133+细胞体外诱导转化实验 收集细胞球，离心(100×g，5 min)，弃上清，加入DMEM基础培养基(5%胎牛血清、5%青霉素、5%链霉素)5 mL进行培养，对细胞生长情况进行观察。

    1.3.3 CD133+细胞体外增殖能力的检测 用干细胞培养基将分选所得CD133+细胞组和CD133-细胞组配成单个细胞悬液，调细胞密度到1×107/L，随后接种细胞至96孔板中，200 μL为一孔，12个复孔为一组 ......