结核性胸积液腺苷脱氨酶2活性及免疫组化研究(1)
【摘要】 目的：研究腺苷脱氨酶2(Adenosine deaminase 2，ADA2)在结核性胸积液总ADA活性所占比例，及其在结核性胸积液胸膜组织中的细胞来源。方法：测定确诊的32例x结核性胸积液ADA2的总ADA和ADA2活性，以ADA2抗体为一抗，用免疫组化方法检测ADA2在结核性胸积液胸膜组织中的细胞来源。结果：ADA2活性占总ADA的74.8%。结核性胸积液胸膜组织的ADA2免疫组化，可见朗格汉斯巨细胞、上皮样细胞和巨噬细胞被深染，胞浆和胞膜有大量的棕黄色沉着。结论：结核性胸积液的ADA活性主要由ADA2构成，ADA2源自巨噬细胞、上皮样细胞和朗格汉斯巨细胞。
【关键词】 结核性胸积液； 腺苷脱氨酶； 同工酶； 腺苷脱氨酶2； 免疫组化
Study on the Activity and Immunohistochemistry of Adenosine Deaminase 2 in Tuberculosis Pleural Effusion/LI Fang-zhi，HUANG Guang-xiong，LU Feng-yue.//Medical Innovation of China，2015，12(18)：039-040
, 百拇医药
【Abstract】 Objective：To investigate the proportion of Adenosine deaminase 2(ADA2) in total ADA activity of the tuberculosis pleural effusion and its cellular source in pleural tissue.Method：The total ADA and ADA2 activity from thirty-two tuberculosis patients’ effusions were measured.The cellular source of ADA2 were examined by immunohistochemistry method using CECR1 antibody.Result：The ADA2 contributed 74.8% to the total ADA.The immunohistochemistry of ADA2 in the pleural tissues of tuberculous pleural effusion showed that langhans cells，epithelioid cells and macrophages were stained deeply.Their cytoplasm and membrane were deposited by yellow granules.Conclusion：ADA2 is primarily responsible for total ADA activity in tuberculosis pleural effusion and it is secreted by macrophages，epithelioid cells and langhans cells.
, 百拇医药
【Key words】 Tuberculosis pleural effusion； Adenosine deaminase； Isoenzymes； Adenosine deaminase 2； Immunohistochemistry
First-author’s address：Guangzhou Chest Hospital，Guangzhou 510095，China
doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2015.18.014
胸积液中腺苷脱氨酶(ADA) 活性升高是诊断结核性胸积液重要的辅助指标之一。ADA有2 种同工酶：ADA1 和ADA2。结核性胸积液ADA活性的升高主要是由ADA同工酶ADA2增高所致，所以ADA2检测在结核性胸积液的诊断有重要作用[1]。Ungerer等[2]检测正常人全身细胞，发现仅单核巨噬细胞有ADA2。本研究通过检测结核性胸腔积液总ADA 和ADA2活性，并用免疫组化方法检测ADA2在结核性胸积液胸膜组织细胞中的细胞分布，以进一步了解ADA2的细胞来源和其在结核性胸积液中的作用机理。
, 百拇医药
1 资料与方法
1.1 一般资料 32例本院结核性胸积液患者，经细菌学或病理活检确诊，胸积液性质为渗出液。
1.2 方法 红-9-(2-羟基-3-壬烷基)腺嘌呤(EHNA)能完全抑制ADA1活性，但不能抑制ADA2活性，参照Muraoka等[3]使用的方法，将每份胸积液标本分成2管，第一管直接测量ADA活性，即为总ADA(ADA1+ADA2)，第二管加入EHNA后测量所得的ADA活性为ADA2活性，采用迈克公司腺苷脱氨酶(ADA)检测试剂盒，罗氏P80自动生化仪测定；ADA2(也称为CECR1)兔抗人多克隆抗体购自Sigma公司，巨噬细胞表面标志物CD68兔抗人多克隆抗体购自博士德公司，辣根过氧化酶标记Envision二步法二抗，购自Dako公司。以免疫组化(Envision二步法)作结核性胸积液胸膜组织的ADA2和巨噬细胞表面标志物CD68的免疫组化：同一蜡块组织以3 ?m间距连切两份，一份以ADA2抗体为一抗工作液作实验对象，另一份以巨噬细胞表面标志物CD68抗体代替ADA2抗体作为一抗的免疫组化为阳性对照。
1.3 阳性判断标准 实验结果判定以胞质内和胞膜上出现棕黄色颗粒为阳性。用PBS代替ADA2抗体作为一抗的免疫组化为阴性对照。CD68抗体代替ADA2抗体作为一抗的免疫组化为阳性对照。
1.4 统计学处理 采用SPSS 17.0统计学软件进行统计学处理，计量资料以(x±s)表示，比较采用t检验，以P<0.05表示差异有统计学意义。, 百拇医药(李方知 黄广雄 卢峰岳)
【关键词】 结核性胸积液； 腺苷脱氨酶； 同工酶； 腺苷脱氨酶2； 免疫组化
Study on the Activity and Immunohistochemistry of Adenosine Deaminase 2 in Tuberculosis Pleural Effusion/LI Fang-zhi，HUANG Guang-xiong，LU Feng-yue.//Medical Innovation of China，2015，12(18)：039-040
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【Abstract】 Objective：To investigate the proportion of Adenosine deaminase 2(ADA2) in total ADA activity of the tuberculosis pleural effusion and its cellular source in pleural tissue.Method：The total ADA and ADA2 activity from thirty-two tuberculosis patients’ effusions were measured.The cellular source of ADA2 were examined by immunohistochemistry method using CECR1 antibody.Result：The ADA2 contributed 74.8% to the total ADA.The immunohistochemistry of ADA2 in the pleural tissues of tuberculous pleural effusion showed that langhans cells，epithelioid cells and macrophages were stained deeply.Their cytoplasm and membrane were deposited by yellow granules.Conclusion：ADA2 is primarily responsible for total ADA activity in tuberculosis pleural effusion and it is secreted by macrophages，epithelioid cells and langhans cells.
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【Key words】 Tuberculosis pleural effusion； Adenosine deaminase； Isoenzymes； Adenosine deaminase 2； Immunohistochemistry
First-author’s address：Guangzhou Chest Hospital，Guangzhou 510095，China
doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2015.18.014
胸积液中腺苷脱氨酶(ADA) 活性升高是诊断结核性胸积液重要的辅助指标之一。ADA有2 种同工酶：ADA1 和ADA2。结核性胸积液ADA活性的升高主要是由ADA同工酶ADA2增高所致，所以ADA2检测在结核性胸积液的诊断有重要作用[1]。Ungerer等[2]检测正常人全身细胞，发现仅单核巨噬细胞有ADA2。本研究通过检测结核性胸腔积液总ADA 和ADA2活性，并用免疫组化方法检测ADA2在结核性胸积液胸膜组织细胞中的细胞分布，以进一步了解ADA2的细胞来源和其在结核性胸积液中的作用机理。
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1 资料与方法
1.1 一般资料 32例本院结核性胸积液患者，经细菌学或病理活检确诊，胸积液性质为渗出液。
1.2 方法 红-9-(2-羟基-3-壬烷基)腺嘌呤(EHNA)能完全抑制ADA1活性，但不能抑制ADA2活性，参照Muraoka等[3]使用的方法，将每份胸积液标本分成2管，第一管直接测量ADA活性，即为总ADA(ADA1+ADA2)，第二管加入EHNA后测量所得的ADA活性为ADA2活性，采用迈克公司腺苷脱氨酶(ADA)检测试剂盒，罗氏P80自动生化仪测定；ADA2(也称为CECR1)兔抗人多克隆抗体购自Sigma公司，巨噬细胞表面标志物CD68兔抗人多克隆抗体购自博士德公司，辣根过氧化酶标记Envision二步法二抗，购自Dako公司。以免疫组化(Envision二步法)作结核性胸积液胸膜组织的ADA2和巨噬细胞表面标志物CD68的免疫组化：同一蜡块组织以3 ?m间距连切两份，一份以ADA2抗体为一抗工作液作实验对象，另一份以巨噬细胞表面标志物CD68抗体代替ADA2抗体作为一抗的免疫组化为阳性对照。
1.3 阳性判断标准 实验结果判定以胞质内和胞膜上出现棕黄色颗粒为阳性。用PBS代替ADA2抗体作为一抗的免疫组化为阴性对照。CD68抗体代替ADA2抗体作为一抗的免疫组化为阳性对照。
1.4 统计学处理 采用SPSS 17.0统计学软件进行统计学处理，计量资料以(x±s)表示，比较采用t检验，以P<0.05表示差异有统计学意义。, 百拇医药(李方知 黄广雄 卢峰岳)