电针刺激环跳穴缓解大鼠炎症性疼痛的方法(2)
1.4 实验设计 大鼠在实验室适应2 d后，在脚掌注射CFA前1 d分别用热板测痛仪检测大鼠的脚掌回缩潜伏期(paw withdrawal latency，PWL)，第2天注射CFA后随即对两组大鼠分别给予EA/sham EA处理(整个过程约120 min，具体方法见后)，电针结束休息30 min后再用热板测痛仪检测大鼠的PWL。比较EA/sham EA处理组大鼠的PWL，衡量大鼠的疼痛缓解与否。
1.5 实验方法
1.5.1 大鼠足底注射CFA CFA原液用振荡器混匀，将其与0.9%氯化钠注射液1∶1配成混合液，再次用振荡器混匀后抽取0.08 mL配制好的CFA液备用。足底注射药物前，先轻柔地抚摸大鼠使其放松，用生理盐水棉球清洁大鼠左侧足底皮肤，然后一个实验者控制住大鼠，另一个实验者轻轻将抽取的0.08 ml CFA的针头刺入大鼠左侧足底皮下，针尖到达脚掌正中，左手固定住大鼠足部和针头刺入点，右手将CFA缓慢推入，左手紧压针眼处拔出针头，右手轻柔的揉搓大鼠足底使CFA充分吸收，避免从针眼处流出。
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1.5.2 测量大鼠的PWL 将大鼠放在罩有有机玻璃盒的热板上适应30 min，随后将大鼠取出。让热板自动加热到50 ℃后保持温度恒定。将大鼠再次放入罩有有机玻璃盒的热板上，盖上有机玻璃盒的盖子，当大鼠舔或者抬起后肢时，停止计时，把大鼠取出。测量大鼠从放入热板到后肢抬起的时间为PWL。正常情况下，PWL保持在10～15 s，如果动物没有反应，在超过20 s后将大鼠取出，以避免大鼠组织损伤。每只动物测试3次，每隔15 min测量1次，求均值。
1.5.3 电针刺激大鼠双侧环跳穴 环跳穴(GB30)靠近髋关节，位于股骨大转子最凸点与骶骨裂孔连线的外1/3与中1/3交点处。给动物电针刺激前2～3天每天轻柔把持大鼠30 min使动物适应环境。在注射CFA后立即给予电针刺激。电针前用酒精棉球清洁大鼠皮肤，然后一个实验者控制住大鼠，另一个实验者轻轻将针灸针插入环跳穴，并用胶带固定于大腿。通过导线将针灸针与电针仪相连。刺激参数：频率10 Hz，电流3 mA，波宽0.1 ms。刺激时间为：电针刺激20 min，中间休息80 min，再给予电针刺激20 min，流程见图1。刺激开始后大鼠的状态为电针周围肌肉的轻微震颤但不会引起大鼠狂躁、嘶叫等异常行为。假电针组(sham EA)只给予针刺操作不进行通电。
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图1 电针刺激及PWL检测流程图
1.6 统计学处理 使用GraphPad Prism 5 软件对数据进行分析和作图，计量资料用(x±s)表示，各组大鼠电针后PWL值进行t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
大鼠足底皮下注射CFA+假电针组(CFA+sham EA)，注射前后测量PWL值，比较差异具有统计学意义(P<0.05)，见表1，说明CFA导致大鼠热痛行为改变，假电针不会缓解CFA引起的热痛行为。大鼠足底皮下注射CFA+电针组(CFA+EA)，注射前后测量PWL值，差异无统计学意义(P>0.05)，见表1，说明电针双侧环跳穴可以缓解CFA导致的大鼠热痛行为。
3 讨论
随着科学的发展和生活水平的提高，人们越来越重视自身的生存质量。疼痛成为继呼吸、脉搏、血压、体温四大命体征之后的第五大生命体征，严重影响人们的生活质量[8]。慢性疼痛严重影响躯体功能和社会功能，尽早控制疼痛可使人们回复正常的日常生活和社交。临床上常采用一些方法去缓解慢性疼痛，如采用甾体类药物注射、服用镇痛药物、局部封闭、手术等，这些方法一定程度上都会给患者造成较大的不良反应。电针刺激作为一种物理治疗方法，具有耗材较小、操作简便、疗效较确定、副作用少等优点，在临床上广泛使用。科学研究中经常会采用电针缓解疼痛作为一种研究手段和方法，但是选取的部位以及电针参数的选择方法各异，其作用机制还有待于进一步深入研究。笔者结合实验室的条件选择了环跳穴，观察到很好的镇痛效果，且定位简单，操作方便，详细描述了具体的刺激参数以及操作手法。这为利用电针缓解疼痛展开深入研究提供了有一种简便、易行的新选择。
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CFA在皮下注射后并不立即出现强烈的疼痛，在作用2 h后疼痛才达到较大峰值，并且可以持续几天以上[1-2]，因此我们选择了在脚掌注射CFA后立即进行电针刺激。电针刺激的流程没有选用单一的持续性刺激，实验中发现，给予大鼠电针刺激20 min后休息80 min，然后再给予20 min的刺激，这样产生的镇痛效果更为有效[9]。120 min的电针流程恰好也是CFA产生疼痛作用达到峰值的作用时间。实验结果也证实，给予环跳穴电针刺激可以较好地缓解CFA皮下注射产生的炎性痛反应。
电针刺激大鼠双侧环跳穴注意事项：(1)固定大鼠时应在牢固的基础上确保大鼠处于比较自然的状态，避免因固定过程粗暴操作导致大鼠产生应激反应或遭受其他伤害而导致实验数据偏差；(2)针灸针应该选择合适的型号，且为一次性使用，以免造成大鼠的感染；(3)为使针灸针更好固定，进针部位在大鼠大腿中下部，与大腿骨一定角度穿行股四头肌，尖端达到环跳穴附近；(4)插入针灸针的过程应该准确且迅速，行针部位过浅于皮下，针刺效果不佳，针刺过深，易扎伤骨膜引起不必要的伤害刺激；(5)胶带要牢固的固定电针，防止电针在实验过程中脱落影响实验效果；(6)电针过程中大鼠应处于清醒、放松状态，根据大鼠的反应适度调整并固定刺激参数，以臀部及大腿肌肉轻微震颤，大鼠无不适反应为准；(7)同时做多只大鼠时应注意避免大鼠之间的情绪感染，给其中一只大鼠固定及插入电针时应将其与其他大鼠分开。
参考文献
[1] Ren K，Dubner R.Inflammatory Models of Pain and Hyperalgesia[J].ILAR J，1999，40(3)：111-118., 百拇医药(侯苗苗等)
1.5 实验方法
1.5.1 大鼠足底注射CFA CFA原液用振荡器混匀，将其与0.9%氯化钠注射液1∶1配成混合液，再次用振荡器混匀后抽取0.08 mL配制好的CFA液备用。足底注射药物前，先轻柔地抚摸大鼠使其放松，用生理盐水棉球清洁大鼠左侧足底皮肤，然后一个实验者控制住大鼠，另一个实验者轻轻将抽取的0.08 ml CFA的针头刺入大鼠左侧足底皮下，针尖到达脚掌正中，左手固定住大鼠足部和针头刺入点，右手将CFA缓慢推入，左手紧压针眼处拔出针头，右手轻柔的揉搓大鼠足底使CFA充分吸收，避免从针眼处流出。
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1.5.2 测量大鼠的PWL 将大鼠放在罩有有机玻璃盒的热板上适应30 min，随后将大鼠取出。让热板自动加热到50 ℃后保持温度恒定。将大鼠再次放入罩有有机玻璃盒的热板上，盖上有机玻璃盒的盖子，当大鼠舔或者抬起后肢时，停止计时，把大鼠取出。测量大鼠从放入热板到后肢抬起的时间为PWL。正常情况下，PWL保持在10～15 s，如果动物没有反应，在超过20 s后将大鼠取出，以避免大鼠组织损伤。每只动物测试3次，每隔15 min测量1次，求均值。
1.5.3 电针刺激大鼠双侧环跳穴 环跳穴(GB30)靠近髋关节，位于股骨大转子最凸点与骶骨裂孔连线的外1/3与中1/3交点处。给动物电针刺激前2～3天每天轻柔把持大鼠30 min使动物适应环境。在注射CFA后立即给予电针刺激。电针前用酒精棉球清洁大鼠皮肤，然后一个实验者控制住大鼠，另一个实验者轻轻将针灸针插入环跳穴，并用胶带固定于大腿。通过导线将针灸针与电针仪相连。刺激参数：频率10 Hz，电流3 mA，波宽0.1 ms。刺激时间为：电针刺激20 min，中间休息80 min，再给予电针刺激20 min，流程见图1。刺激开始后大鼠的状态为电针周围肌肉的轻微震颤但不会引起大鼠狂躁、嘶叫等异常行为。假电针组(sham EA)只给予针刺操作不进行通电。
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图1 电针刺激及PWL检测流程图
1.6 统计学处理 使用GraphPad Prism 5 软件对数据进行分析和作图，计量资料用(x±s)表示，各组大鼠电针后PWL值进行t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
大鼠足底皮下注射CFA+假电针组(CFA+sham EA)，注射前后测量PWL值，比较差异具有统计学意义(P<0.05)，见表1，说明CFA导致大鼠热痛行为改变，假电针不会缓解CFA引起的热痛行为。大鼠足底皮下注射CFA+电针组(CFA+EA)，注射前后测量PWL值，差异无统计学意义(P>0.05)，见表1，说明电针双侧环跳穴可以缓解CFA导致的大鼠热痛行为。
3 讨论
随着科学的发展和生活水平的提高，人们越来越重视自身的生存质量。疼痛成为继呼吸、脉搏、血压、体温四大命体征之后的第五大生命体征，严重影响人们的生活质量[8]。慢性疼痛严重影响躯体功能和社会功能，尽早控制疼痛可使人们回复正常的日常生活和社交。临床上常采用一些方法去缓解慢性疼痛，如采用甾体类药物注射、服用镇痛药物、局部封闭、手术等，这些方法一定程度上都会给患者造成较大的不良反应。电针刺激作为一种物理治疗方法，具有耗材较小、操作简便、疗效较确定、副作用少等优点，在临床上广泛使用。科学研究中经常会采用电针缓解疼痛作为一种研究手段和方法，但是选取的部位以及电针参数的选择方法各异，其作用机制还有待于进一步深入研究。笔者结合实验室的条件选择了环跳穴，观察到很好的镇痛效果，且定位简单，操作方便，详细描述了具体的刺激参数以及操作手法。这为利用电针缓解疼痛展开深入研究提供了有一种简便、易行的新选择。
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CFA在皮下注射后并不立即出现强烈的疼痛，在作用2 h后疼痛才达到较大峰值，并且可以持续几天以上[1-2]，因此我们选择了在脚掌注射CFA后立即进行电针刺激。电针刺激的流程没有选用单一的持续性刺激，实验中发现，给予大鼠电针刺激20 min后休息80 min，然后再给予20 min的刺激，这样产生的镇痛效果更为有效[9]。120 min的电针流程恰好也是CFA产生疼痛作用达到峰值的作用时间。实验结果也证实，给予环跳穴电针刺激可以较好地缓解CFA皮下注射产生的炎性痛反应。
电针刺激大鼠双侧环跳穴注意事项：(1)固定大鼠时应在牢固的基础上确保大鼠处于比较自然的状态，避免因固定过程粗暴操作导致大鼠产生应激反应或遭受其他伤害而导致实验数据偏差；(2)针灸针应该选择合适的型号，且为一次性使用，以免造成大鼠的感染；(3)为使针灸针更好固定，进针部位在大鼠大腿中下部，与大腿骨一定角度穿行股四头肌，尖端达到环跳穴附近；(4)插入针灸针的过程应该准确且迅速，行针部位过浅于皮下，针刺效果不佳，针刺过深，易扎伤骨膜引起不必要的伤害刺激；(5)胶带要牢固的固定电针，防止电针在实验过程中脱落影响实验效果；(6)电针过程中大鼠应处于清醒、放松状态，根据大鼠的反应适度调整并固定刺激参数，以臀部及大腿肌肉轻微震颤，大鼠无不适反应为准；(7)同时做多只大鼠时应注意避免大鼠之间的情绪感染，给其中一只大鼠固定及插入电针时应将其与其他大鼠分开。
参考文献
[1] Ren K，Dubner R.Inflammatory Models of Pain and Hyperalgesia[J].ILAR J，1999，40(3)：111-118., 百拇医药(侯苗苗等)