黄芩素对喉癌Hep—2细胞增殖的抑制作用(1)
【摘要】 目的：探讨黄芩素对人喉癌Hep-2细胞的增殖抑制作用。方法：Hep-2细胞在含黄芩素(10～80 μmol/L)的培养基中，分别培养24 h及48 h，用MTT法检测对细胞增殖的影响；用台盼兰染色法检测对细胞活力的影响；用吖啶橙染色法(AO染色法)检测对细胞形态的影响。结果：黄芩素呈时间-剂量依赖性的抑制Hep-2细胞的增殖，并可使细胞活力明显降低；AO染色法显示，黄芩素可诱导Hep-2细胞形态发生明显变化，呈凋亡形态。结论：黄芩素可抑制喉癌Hep-2细胞增殖，降低细胞活力，诱导喉癌Hep-2细胞呈典型的凋亡形态。
【关键词】 黄芩素； 喉癌细胞； 细胞增殖； 细胞活力； 凋亡
【Abstract】 Objective：To study the influence of baicalein on proliferation in laryngeal cancer cell Hep-2 in vitro.Method：Hep-2 cells were exposed to baicalein at concentrations from 10 to 80μmol/L， cultured for 24 h or 48 h.MTT was used to determine cell proliferation，trypan blue exclusion experiments was used to evaluate cell viability，acridine orange(AO) fluorescence staining was used to determine the effect on the cell morphology. Result：Baicalein could inhibit the proliferation of Hep-2 cells in a time-and dose-dependent manner.The viability was down regulated by baicalein.AO fluorescence staining showed that the cell morphology was changed by baicalein significantly. Conclusion：Baicalein can inhibit the cell proliferation， viability and induce apoptosis in typical morphology of laryngeal cancer Hep-2 cells significantly.
, 百拇医药
【Key words】 Baicalein； Laryngeal cancer cell； Cell proliferation； Cell viability； Apoptosis
First-author’s address：Changchun Medicial College，Changchun 130031，China
doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2015.21.002
黄芩素(baicalein，BAI)是从传统中药黄芩的根中提取出的一种主要有效成分，它属于黄酮类化合物[1]。一些以黄芩素作为主要成分的制剂应用于抗菌、抗病毒、抗过敏、抗血栓等多种方面疾病的治疗[2-3]。近几年来，一些研究表明，黄芩素可以抑制胰腺癌、皮肤癌、宫颈癌细胞等的增殖，诱导凋亡[4-6]，但具体作用机制尚待深入研究。喉癌是一种常见的头颈部鳞状细胞癌，具有预后不良、高死亡率等特点，局部发生转移的患者又以预后不良、高死亡率为特点[7-10]。目前国内外尚未见黄芩素对喉癌的抑制作用相关研究。本实验拟对不同浓度黄芩素对人喉癌Hep-2细胞的生长抑制和诱导凋亡作用进行研究，从而为进一步阐明黄芩素的抗癌机制及临床应用提供实验依据。
, 百拇医药
1 资料与方法
1.1 一般资料 人喉癌Hep-2细胞购于上海细胞生物研究所。黄芩素(Baicalein)购于美国SIGMA公司，用DMSO溶解后配成贮存液置于-20 ℃冰箱保存，实验时稀释至所需浓度。胎牛血清、四甲基偶氮唑蓝(MTT)、台盼兰和吖啶橙(AO)购于北京鼎国生物技术公司。RPMI1640培养基购于GIBCO/BRL公司。
1.2 细胞培养 喉癌细胞株Hep-2于含5%胎牛血清FBS(经56 ℃ 30 min灭活)，100 U/mL青霉素及100 μg/mL链霉素的RPMI1640培养液中，单层细胞培养；37 ℃ 5% CO2孵箱中培养传代，每次传代均以0.25%胰蛋白酶消化，洗涤一次，更换新培养基。取对数生长期的细胞用于后续实验。
1.3 MTT法检测细胞增殖 取对数期生长的Hep-2细胞按每孔5×103 个细胞接种于96孔培养板中，用5%FBS的RPMI1640培养液培养24 h后，更换成无血清的RPMI1640培养液同步化培养24 h，再更换成5%FBS的RPMI1640培养液，并加入黄芩素(10、20、40、80 μmol/L)，每组药物浓度设5个复孔，同时设不加药物的阴性对照(加入溶剂DMSO)和不接种细胞的空白对照。在CO2孵箱中分别培养24 h及48 h后，每孔加入20 μL MTT，继续孵育4 h后，弃上清液，加入150 μL DMSO， 轻轻振荡10 min，等结晶物完全溶解后，利用酶标仪，在570 nm波长处检测各孔A值，按细胞增殖抑制率(%)=(1-药物处理组A570值/阴性对照组A570值)×100%计算药物对细胞增殖的抑制率。
1.4 台盼兰染色法检测细胞活力 取对数期生长的Hep-2细胞，按每孔5×103个细胞接种于24孔培养板中，每孔1 mL，5%FBS的RPMI1640培养液培养24 h后，更换成无血清的RPMI1640培养液同步化培养24 h，最后再更换成5%FBS的RPMI1640培养液，并加入终浓度分别为10、20、40、80 μmol/L的黄芩素1 μL，每组药物浓度设5个复孔，同时设不加药物的阴性对照(加入溶剂DMSO)。细胞加药后置于37 ℃、5%CO2孵箱中孵育48 h后，制成单细胞悬液。再用0.4%的台盼兰染色，染色2～3 min，并在光学显微镜下计数拒染的活细胞。每瓶取5个视野，数100个细胞，计数该视野内的活细胞数和死细胞数；实验重复5次，求平均值，并计算细胞活力=平均活细胞数/(平均活细胞数+平均死细胞数)。, 百拇医药(孙吉凤 刘剑凯 张淑芳)
【关键词】 黄芩素； 喉癌细胞； 细胞增殖； 细胞活力； 凋亡
【Abstract】 Objective：To study the influence of baicalein on proliferation in laryngeal cancer cell Hep-2 in vitro.Method：Hep-2 cells were exposed to baicalein at concentrations from 10 to 80μmol/L， cultured for 24 h or 48 h.MTT was used to determine cell proliferation，trypan blue exclusion experiments was used to evaluate cell viability，acridine orange(AO) fluorescence staining was used to determine the effect on the cell morphology. Result：Baicalein could inhibit the proliferation of Hep-2 cells in a time-and dose-dependent manner.The viability was down regulated by baicalein.AO fluorescence staining showed that the cell morphology was changed by baicalein significantly. Conclusion：Baicalein can inhibit the cell proliferation， viability and induce apoptosis in typical morphology of laryngeal cancer Hep-2 cells significantly.
, 百拇医药
【Key words】 Baicalein； Laryngeal cancer cell； Cell proliferation； Cell viability； Apoptosis
First-author’s address：Changchun Medicial College，Changchun 130031，China
doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2015.21.002
黄芩素(baicalein，BAI)是从传统中药黄芩的根中提取出的一种主要有效成分，它属于黄酮类化合物[1]。一些以黄芩素作为主要成分的制剂应用于抗菌、抗病毒、抗过敏、抗血栓等多种方面疾病的治疗[2-3]。近几年来，一些研究表明，黄芩素可以抑制胰腺癌、皮肤癌、宫颈癌细胞等的增殖，诱导凋亡[4-6]，但具体作用机制尚待深入研究。喉癌是一种常见的头颈部鳞状细胞癌，具有预后不良、高死亡率等特点，局部发生转移的患者又以预后不良、高死亡率为特点[7-10]。目前国内外尚未见黄芩素对喉癌的抑制作用相关研究。本实验拟对不同浓度黄芩素对人喉癌Hep-2细胞的生长抑制和诱导凋亡作用进行研究，从而为进一步阐明黄芩素的抗癌机制及临床应用提供实验依据。
, 百拇医药
1 资料与方法
1.1 一般资料 人喉癌Hep-2细胞购于上海细胞生物研究所。黄芩素(Baicalein)购于美国SIGMA公司，用DMSO溶解后配成贮存液置于-20 ℃冰箱保存，实验时稀释至所需浓度。胎牛血清、四甲基偶氮唑蓝(MTT)、台盼兰和吖啶橙(AO)购于北京鼎国生物技术公司。RPMI1640培养基购于GIBCO/BRL公司。
1.2 细胞培养 喉癌细胞株Hep-2于含5%胎牛血清FBS(经56 ℃ 30 min灭活)，100 U/mL青霉素及100 μg/mL链霉素的RPMI1640培养液中，单层细胞培养；37 ℃ 5% CO2孵箱中培养传代，每次传代均以0.25%胰蛋白酶消化，洗涤一次，更换新培养基。取对数生长期的细胞用于后续实验。
1.3 MTT法检测细胞增殖 取对数期生长的Hep-2细胞按每孔5×103 个细胞接种于96孔培养板中，用5%FBS的RPMI1640培养液培养24 h后，更换成无血清的RPMI1640培养液同步化培养24 h，再更换成5%FBS的RPMI1640培养液，并加入黄芩素(10、20、40、80 μmol/L)，每组药物浓度设5个复孔，同时设不加药物的阴性对照(加入溶剂DMSO)和不接种细胞的空白对照。在CO2孵箱中分别培养24 h及48 h后，每孔加入20 μL MTT，继续孵育4 h后，弃上清液，加入150 μL DMSO， 轻轻振荡10 min，等结晶物完全溶解后，利用酶标仪，在570 nm波长处检测各孔A值，按细胞增殖抑制率(%)=(1-药物处理组A570值/阴性对照组A570值)×100%计算药物对细胞增殖的抑制率。
1.4 台盼兰染色法检测细胞活力 取对数期生长的Hep-2细胞，按每孔5×103个细胞接种于24孔培养板中，每孔1 mL，5%FBS的RPMI1640培养液培养24 h后，更换成无血清的RPMI1640培养液同步化培养24 h，最后再更换成5%FBS的RPMI1640培养液，并加入终浓度分别为10、20、40、80 μmol/L的黄芩素1 μL，每组药物浓度设5个复孔，同时设不加药物的阴性对照(加入溶剂DMSO)。细胞加药后置于37 ℃、5%CO2孵箱中孵育48 h后，制成单细胞悬液。再用0.4%的台盼兰染色，染色2～3 min，并在光学显微镜下计数拒染的活细胞。每瓶取5个视野，数100个细胞，计数该视野内的活细胞数和死细胞数；实验重复5次，求平均值，并计算细胞活力=平均活细胞数/(平均活细胞数+平均死细胞数)。, 百拇医药(孙吉凤 刘剑凯 张淑芳)