人β—防御素—2在肝细胞癌中的表达及其意义(2)
1.3 方法
1.3.1 检测HBD-2 mRNA的表达 根据说明书，采用Trizol法从所有肝癌组织、肝癌癌旁组织和正常肝组织标本中提取mRNA，根据逆转录试剂盒说明，将mRNA逆转录成cDNA；将cDNA用于PremixTaq Version2.0试剂做PCR分析表达情况。并将cDNA用于Real-Time PCR，定量检测HBD-2 mRNA表达情况，具体的方法按照试剂盒说明进行。Real-Time PCR工作条件：95 ℃ 4 min；94 ℃ 30 s，65 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，进行40个循环；75℃ 5 min。对HBD-2 mRNA以及内参照β-actin分别进行实时荧光定量PCR进行扩增，PCR定量计算mRNA，待测样品中的表达量用2-△Ct表示，2-△Ct=2-(Ct目的基因-Ct内参基因)。
1.3.2 检测HBD-2蛋白的表达 采用链霉素抗生物素蛋白-过氧化酶连接(SP)法，HBD-2一抗工作浓度为1∶50。实验步骤依据试剂盒说明进行。结果判断：组织切片染色以胞浆中染成淡黄或棕黄色为阳性，根据阳性细胞百分率分为：阳性细胞数<5%为阴性 ......
您现在查看是摘要页，全文长 4524 字符。
1.3.1 检测HBD-2 mRNA的表达 根据说明书，采用Trizol法从所有肝癌组织、肝癌癌旁组织和正常肝组织标本中提取mRNA，根据逆转录试剂盒说明，将mRNA逆转录成cDNA；将cDNA用于PremixTaq Version2.0试剂做PCR分析表达情况。并将cDNA用于Real-Time PCR，定量检测HBD-2 mRNA表达情况，具体的方法按照试剂盒说明进行。Real-Time PCR工作条件：95 ℃ 4 min；94 ℃ 30 s，65 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，进行40个循环；75℃ 5 min。对HBD-2 mRNA以及内参照β-actin分别进行实时荧光定量PCR进行扩增，PCR定量计算mRNA，待测样品中的表达量用2-△Ct表示，2-△Ct=2-(Ct目的基因-Ct内参基因)。
1.3.2 检测HBD-2蛋白的表达 采用链霉素抗生物素蛋白-过氧化酶连接(SP)法，HBD-2一抗工作浓度为1∶50。实验步骤依据试剂盒说明进行。结果判断：组织切片染色以胞浆中染成淡黄或棕黄色为阳性，根据阳性细胞百分率分为：阳性细胞数<5%为阴性 ......
您现在查看是摘要页，全文长 4524 字符。