T辅助淋巴细胞的功能变化在急性肺损伤中的意义研究(2)
1.2.3 浓度测定 在检测细胞当中的相关因子浓度时，需要用到IFN-γ酶的专门吸附盒和IL-4酶的专门吸附盒，按照吸附盒上面的具体要求进行细胞测定，利用酶标仪对波长500 nm的位置进行密度检测，按照标准曲线的变化规律，最终确定小鼠细胞当中的具体因子浓度。
1.2.4 基因表达数量计算 利用PCR的标准测定试剂盒，进行小鼠脾细胞当中的基因转录，使其最终合成cDNA，然后进行PCR的有效扩增。对引物序列进行正常排序，主要包括IFN-γ、IL-4以及β-actin的序列引物，它们分别有各自的上游引物和下游引物。经过对引物图像的观察和分析进行产物测量，对三大序列产物进行正常扫描，确定出具体的光密度数值，最后进行三大序列引物光密度数值的相互对比，从而测得基因表达。
1.2.5 损伤指标检测 首先进行肺组织含水量的正常检测，在处死小鼠以后，把小鼠的右肺进行有效割除，进行表面水清除之后进行肺组织称重，称重之后放到专门烘箱当中进行有效烘干后称重；然后进行漏出量的具体检测，在小鼠腹腔当中进行药物注射，处死小鼠之后利用专用针进行小鼠右心室的有效穿刺，利用适当浓度的生理盐水进行小鼠肺部的清洗，使其完全干净，切除小鼠的肺部相关组织，对肺门组织进行正常称重，进行小鼠肺组织的孵育，孵育的时候要添加适量的甲酰胺，收集其浸出的液体，进行液体吸光值的具体有效计算。对照组小鼠确定伊文思蓝的具体浓度值；最后进行小鼠肺组织的有效观察，进行肺下叶的正常染色，观察其病理变化情况，利用相关分析软件确定出细胞PMN的平均值。
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1.3 观察项目和指标 (1)小鼠上清液中IFN-γ的含量及IL-4含量；(2)脾细胞中IFN-γ的基因表达能力[2]。
1.4 统计学处理 所得数据采用SPSS 20.0软件进行统计学分析，计量资料以(x±s)表示，比较采用t检验，以P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
观察组小鼠上清液中IFN-γ的含量明显低于对照组，IL-4含量明显高于对照组，两组比较差异有统计学意义(P<0.05)，观察组小鼠体内脾细胞中IFN-γ基因表达能力明显低于对照组，两组比较差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。
3 讨论
急性肺损伤是一种各种致病因素引发的广泛肺泡毛细血管损伤，以致炎因子释放、中性粒细胞浸润、广泛肺泡毛细血管损伤为特征，临床以难以纠正的低氧血症及进行性呼吸困难为主要表现，急性严重肺损伤，在临床被定义为急性呼吸窘迫综合征[3]。如何对肺损伤过程中肺泡受损毛细血管保护并修复，是肺保护的重点。ALI的发生发展，由机体过度炎症反应参与介导[4]。危重病医学会在2001年将机体过度炎症反应定义为全身炎症反应综合征，其后果为破坏机体自身组织。机体内源性抗炎症反应伴随炎症反应的发生，呈增强趋势[5]。Bone等[6]将此种抗炎症反应按抗炎症反应综合征概括，其引发的后果是脓毒症及免疫功能低下，故不管哪方占优势，ALI病发中，促炎及抗炎反应失衡均为本质原因。故针对检测的促炎、抗炎反应失衡的程度和方向，应用不同的措施干预，使双方动态平衡恢复，是对ALI防治的关键。但对促炎、抗炎双方平衡的相关性评价，目前临床尚无有效评估指标。有研究显示，Th细胞，可反映双方平衡关系，Th1细胞以对促炎细胞因子分泌为特征，与促炎反应有密切相关性；Th2细胞以对抗炎细胞因子分泌为特征，与抗炎反应有密切相关性[7-9]。IFN-γ、IL-4为特征性细胞因子，分别由Th1、Th2细胞分泌，二者平衡，可反映促炎和抗炎的平衡情况。
, 百拇医药
有研究示，取LPS、FNLP经腹腔注射后，肺湿重与干重比、肺伊文斯蓝浸出量、肺病理改变均提示成功建立ALI模型[10]。对脾细胞中IL-4、IFN-γ变化进行观察，结果相较对照组，BLAB/C小鼠在ALI时，脾细胞中IFN-γ呈近60%的下降，而检测IL-4，呈4倍多的升高。此与蒋雄斌等[10]报道一致，但IL-4升高更为明显。
IFN-γ、IL-4是反映Th1及Th2平衡变化的典型细胞因子，此种变化表明，在ALI发生时，Th1漂移至Th2。目前研究显示，Th1飘移至Th2，与下列因素可能相关。(1)LPS结合单核巨噬细胞表面CD14受体，对TNFα、IL-1等炎症细胞因子释放，同时伴随大量抑制介质前列腺素E2的释放，经PGF2依赖性通道，促使Th细胞向Th2表型明确转化。PGE2可对Th1合成IFN-γ、IL-2明显抑制，却对Th2生成IL-4不影响[11]。(2)与炎症介质IL-6、IL-1、TNF-α的释放伴发，糖皮质激素有增加表现，糖皮质激素可对Th1细胞核转录抑制因子合成增加产生刺激，此因子与核因子结合，促使复合物形成，从而对炎症细胞因子的基因转录阻止[12]。此外，糖皮质激素，可影响炎症细胞因子相关基因转录。
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对脾细胞中的IFN-γmRNA表达进一步观察得出，ALI时IFN-γmRNA表达下降明显，IL-4m RNA表达量显著升高。提示ALI时，可在mRNA水平上使促炎细胞因子IFN-γ的表达抑制，抗炎细胞因子IL-4的表达增加，从而引发促炎、抗炎失衡。
Th1向Th2飘移，表明抗炎症反应在ALI发生时，呈增强趋势，而抗炎症反应的增强，诱导机体细胞免疫功能出现低下。故可通过对Th1、Th2平衡变化检测，选择适当的时机，针对免疫功能低下，采取有效的免疫调节措施，使促炎、抗炎平衡恢复，对ALI进行防治。促炎与抗炎反应失衡，为诱导急性肺损伤发生的本质原因，对促炎与抗炎反应失衡准确评估有较大难度[13]。T辅助淋巴细胞可反映机体炎症反应的免疫功能状态。
在受到严重的创伤之后，伤口是容易感染的，而在感染之后，伤口处容易出现各种病毒和细菌，会严重损害人们的身体健康。相关研究结果证明，急性肺损伤与体内炎症反应不平衡相关，会导致机体促炎、抗炎反应不平衡[14]。机体内各类脾细胞当中，存在很多促炎细胞和抗炎细胞，比如干扰素和白介素等，只有保证这两种因子平衡，才能保证两种细胞平衡[15]。当发生急性肺损伤，机体炎症反应规律是不明确的，各种细胞的反应情况也是不明确的，本文主要通过对急性肺损伤小鼠的功能试验研究，反应急性肺损伤机体炎症反应情况。, 百拇医药(林明 杨自力)
1.2.4 基因表达数量计算 利用PCR的标准测定试剂盒，进行小鼠脾细胞当中的基因转录，使其最终合成cDNA，然后进行PCR的有效扩增。对引物序列进行正常排序，主要包括IFN-γ、IL-4以及β-actin的序列引物，它们分别有各自的上游引物和下游引物。经过对引物图像的观察和分析进行产物测量，对三大序列产物进行正常扫描，确定出具体的光密度数值，最后进行三大序列引物光密度数值的相互对比，从而测得基因表达。
1.2.5 损伤指标检测 首先进行肺组织含水量的正常检测，在处死小鼠以后，把小鼠的右肺进行有效割除，进行表面水清除之后进行肺组织称重，称重之后放到专门烘箱当中进行有效烘干后称重；然后进行漏出量的具体检测，在小鼠腹腔当中进行药物注射，处死小鼠之后利用专用针进行小鼠右心室的有效穿刺，利用适当浓度的生理盐水进行小鼠肺部的清洗，使其完全干净，切除小鼠的肺部相关组织，对肺门组织进行正常称重，进行小鼠肺组织的孵育，孵育的时候要添加适量的甲酰胺，收集其浸出的液体，进行液体吸光值的具体有效计算。对照组小鼠确定伊文思蓝的具体浓度值；最后进行小鼠肺组织的有效观察，进行肺下叶的正常染色，观察其病理变化情况，利用相关分析软件确定出细胞PMN的平均值。
, http://www.100md.com
1.3 观察项目和指标 (1)小鼠上清液中IFN-γ的含量及IL-4含量；(2)脾细胞中IFN-γ的基因表达能力[2]。
1.4 统计学处理 所得数据采用SPSS 20.0软件进行统计学分析，计量资料以(x±s)表示，比较采用t检验，以P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
观察组小鼠上清液中IFN-γ的含量明显低于对照组，IL-4含量明显高于对照组，两组比较差异有统计学意义(P<0.05)，观察组小鼠体内脾细胞中IFN-γ基因表达能力明显低于对照组，两组比较差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。
3 讨论
急性肺损伤是一种各种致病因素引发的广泛肺泡毛细血管损伤，以致炎因子释放、中性粒细胞浸润、广泛肺泡毛细血管损伤为特征，临床以难以纠正的低氧血症及进行性呼吸困难为主要表现，急性严重肺损伤，在临床被定义为急性呼吸窘迫综合征[3]。如何对肺损伤过程中肺泡受损毛细血管保护并修复，是肺保护的重点。ALI的发生发展，由机体过度炎症反应参与介导[4]。危重病医学会在2001年将机体过度炎症反应定义为全身炎症反应综合征，其后果为破坏机体自身组织。机体内源性抗炎症反应伴随炎症反应的发生，呈增强趋势[5]。Bone等[6]将此种抗炎症反应按抗炎症反应综合征概括，其引发的后果是脓毒症及免疫功能低下，故不管哪方占优势，ALI病发中，促炎及抗炎反应失衡均为本质原因。故针对检测的促炎、抗炎反应失衡的程度和方向，应用不同的措施干预，使双方动态平衡恢复，是对ALI防治的关键。但对促炎、抗炎双方平衡的相关性评价，目前临床尚无有效评估指标。有研究显示，Th细胞，可反映双方平衡关系，Th1细胞以对促炎细胞因子分泌为特征，与促炎反应有密切相关性；Th2细胞以对抗炎细胞因子分泌为特征，与抗炎反应有密切相关性[7-9]。IFN-γ、IL-4为特征性细胞因子，分别由Th1、Th2细胞分泌，二者平衡，可反映促炎和抗炎的平衡情况。
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有研究示，取LPS、FNLP经腹腔注射后，肺湿重与干重比、肺伊文斯蓝浸出量、肺病理改变均提示成功建立ALI模型[10]。对脾细胞中IL-4、IFN-γ变化进行观察，结果相较对照组，BLAB/C小鼠在ALI时，脾细胞中IFN-γ呈近60%的下降，而检测IL-4，呈4倍多的升高。此与蒋雄斌等[10]报道一致，但IL-4升高更为明显。
IFN-γ、IL-4是反映Th1及Th2平衡变化的典型细胞因子，此种变化表明，在ALI发生时，Th1漂移至Th2。目前研究显示，Th1飘移至Th2，与下列因素可能相关。(1)LPS结合单核巨噬细胞表面CD14受体，对TNFα、IL-1等炎症细胞因子释放，同时伴随大量抑制介质前列腺素E2的释放，经PGF2依赖性通道，促使Th细胞向Th2表型明确转化。PGE2可对Th1合成IFN-γ、IL-2明显抑制，却对Th2生成IL-4不影响[11]。(2)与炎症介质IL-6、IL-1、TNF-α的释放伴发，糖皮质激素有增加表现，糖皮质激素可对Th1细胞核转录抑制因子合成增加产生刺激，此因子与核因子结合，促使复合物形成，从而对炎症细胞因子的基因转录阻止[12]。此外，糖皮质激素，可影响炎症细胞因子相关基因转录。
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对脾细胞中的IFN-γmRNA表达进一步观察得出，ALI时IFN-γmRNA表达下降明显，IL-4m RNA表达量显著升高。提示ALI时，可在mRNA水平上使促炎细胞因子IFN-γ的表达抑制，抗炎细胞因子IL-4的表达增加，从而引发促炎、抗炎失衡。
Th1向Th2飘移，表明抗炎症反应在ALI发生时，呈增强趋势，而抗炎症反应的增强，诱导机体细胞免疫功能出现低下。故可通过对Th1、Th2平衡变化检测，选择适当的时机，针对免疫功能低下，采取有效的免疫调节措施，使促炎、抗炎平衡恢复，对ALI进行防治。促炎与抗炎反应失衡，为诱导急性肺损伤发生的本质原因，对促炎与抗炎反应失衡准确评估有较大难度[13]。T辅助淋巴细胞可反映机体炎症反应的免疫功能状态。
在受到严重的创伤之后，伤口是容易感染的，而在感染之后，伤口处容易出现各种病毒和细菌，会严重损害人们的身体健康。相关研究结果证明，急性肺损伤与体内炎症反应不平衡相关，会导致机体促炎、抗炎反应不平衡[14]。机体内各类脾细胞当中，存在很多促炎细胞和抗炎细胞，比如干扰素和白介素等，只有保证这两种因子平衡，才能保证两种细胞平衡[15]。当发生急性肺损伤，机体炎症反应规律是不明确的，各种细胞的反应情况也是不明确的，本文主要通过对急性肺损伤小鼠的功能试验研究，反应急性肺损伤机体炎症反应情况。, 百拇医药(林明 杨自力)