灵芝孢子油抑制前列腺癌LNCaP细胞中AR激活及转录活性(2)
1.2 细胞株和细胞培养 LNCaP细胞(购自上海细胞库)培养于DMEM完全培养基(10%胎牛血清、100 U/mL青霉素、100 ng/mL链霉素)中,培养条件为37 ℃,5% CO2。1.3 细胞增殖检测 采用CCK-8法检测细胞增殖活性。简述如下:LNCaP细胞消化铺至96孔板中,100 μL/孔,细胞数量为1000/孔。将培养板在37 ℃、5% CO2培养箱预培养过夜,每孔1∶100加入CCK-8溶液,放置培养箱内孵育2~4 h后Bio-Rad model 680 microplate reader酶标仪在450 nm波长处测定吸光度(OD),按如下公式计算细胞活性:细胞增殖活力/%=(处理组OD值-空白对照组OD值)/(对照组OD值-空白对照组OD值)×100%。
1.4 实验处理及质粒转染 将LNCaP细胞分三组,即Control组、DHT处理组、DHT和灵芝孢子油共同处理组(DHT+Oil)。将对数期生长的LNCaP细胞按合适的密度和上述分组分别接种于24孔板或6孔板中,过夜后:(1)按上述处理组分别加入Control组(DMSO)、DHT(10 nM)、DHT(10 nM)+Oil(20 μg/mL) ......
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