1 资料与方法

    1.1 一般资料 本研究选取内蒙古医科大学附属医院胸外科2013年3月-2014年5月经手术切除、病理科确诊为食道鳞状细胞癌的标本共12例，其中男9例，女3例，年龄36～78岁，平均(53.61±10.63)岁，所有患者于术前均未行放化疗治疗。病理类型均为鳞状细胞癌，其中Ⅱ级8例，Ⅲ级4例。另选择距肿瘤边缘2 cm处经病理证实为正常组织的食道黏膜作为对照，全部实验标本均经4%多聚甲醛固定、石蜡包埋，切厚度为5 μm片，烤片备用。

    1.2 主要试剂 碱性磷酸酶标记的地高辛抗体、底物BCIP/NBT购于Roche公司，蛋白激酶K购于Promega公司，探针购于爱科博生物公司，无水乙醇、二甲苯等试剂均为分析纯。

    1.3 原位杂交方法检测 将事先粘片备好的石蜡切片脱蜡经梯度二甲苯脱蜡，梯度乙醇脱水处理，置于蛋白激酶K中，37 ℃水浴箱消化15 min，PBS清洗2次(每次5 min)。4%多聚甲醛固定，PBS清洗2次(每次5 min)。在预杂交液中，37 ℃孵育2 h。切片滴加探针，盖上盖玻片置于42 ℃水浴箱中杂交过夜。滴加碱性磷酸酶标记的地高辛抗体(Dig-AKP) ......