中国东北人群中转化生长因子—α基因rs3771494单核苷酸多态性与非综合征唇腭裂的关系(2)
1.2 仪器与试剂 点样仪(Nano-Plotter 2.1,GeSiM,德国),GenePix 4000B共聚焦激光扫描仪(Axon Instruments,USA);TIANamp血液DNA提取试剂盒(TIANGEN);TGF-α基因PCR扩增引物:上游:TCACTTCCCCTTTTTCATCTG,下游:CGAGGAGGCTCCTGAGGTG(金斯瑞生物科技有限公司合成),产物长度为179 bp。DNA聚合酶采用NEB的vent DNA聚合酶。EXOI(Takara),碱性磷酸酶(Takara)。芯片的制备及基因型检测所用探针和特异性延伸引物及阳性对照(南京生物科技有限公司合成)见表1。1.3 方法 全基因组DNA提取、PCR扩增、特异性引物延伸、杂交及基因芯片结果扫描。所有患者抽取静脉血5 mL,EDTA抗凝,-20 ℃冻存备用。所有患者均取500 μL外周血,利用TIANGEN全基因组核酸提取试剂盒提取白细胞全基因组DNA后,进行PCR扩增,反应在20 ?L中进行,其中包括基因组DNA 2.5 ng ......
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