30 min，加DAPI，孵育5 min后采用激光共聚焦显微镜、倒置相差荧光显微镜下观察心肌细胞及荧光表达。

    1.2.5 心肌肥大细胞模型的构建 心肌细胞原代培养第2天，向培养基中加入终浓度为100 μM的PE培养72 h，通过细胞免疫组化、细胞总蛋白量测定、心肌肥大相关基因检测、流式细胞术检测心肌细胞大小的方法对心肌肥大模型进行评估。

    1.2.6 心肌细胞中miR181b与prkg1 mRNA的表达 搜集PE组及对照组心肌细胞，采用TRIzol法抽取RNA，逆转录为cDNA后，采用SYBR Green法检测心肌细胞miR181b与prkg1 mRNA的表达，prkg1 mRNA的定量PCR体系按照如下标准配置：SYBR EX Taq 12.5 μL，上游引物0.5 μL，下游引物0.5μL，模板cDNA 2μL，ddH2O 10.5 μL；prkg1 mRNA 定量PCR反应条件：预变性95 ℃ 10 s；40个循环：95 ℃，5 s；60 ℃，30 s。

    1.2.7 心肌细胞中PKG1蛋白的表达 收集PE组、对照组的细胞 ......