1.2 人腹膜间皮细胞的分离、培养与鉴定 本实验从连续性腹膜透析患者透出液中分离并提取人腹膜间皮细胞，无菌条件下收集患者流出液标本，于4 ℃1000 r/min离心10 min，弃除上清。用D-Hank’s平衡盐溶液洗涤沉淀2次，将细胞接种于含10%(V/V)胎牛血清的1640培养液的培养瓶中，置于CO2培养箱中37 ℃培养。培养24 h后，光镜下观察贴壁生长情况，待贴壁良好后用新鲜培养液替换旧培养液，此后约每3天换液一次。待细胞生长融合成单层细胞后，用0.125%胰蛋白酶-0.01%EDTA 2 mL混合液消化细胞，吸管吹打均匀，使细胞密度保持在(1×105～1×106)/mL。第二代细胞用于形态学及免疫组化鉴定，第三代细胞进行实验研究。免疫组化显示抗细胞角蛋白抗体阳性、抗波形蛋白抗体染色阳性，这正是间皮细胞的免疫学特征。抗第Ⅷ因子抗体和抗白细胞CD45抗体染色阴性，由此可排除血管内皮细胞、成纤维细胞等。

    1.3 分组与处理 将培养至第三代的人腹膜间皮细胞均匀接种在6孔培养板上，当细胞贴壁生长达约80%融合状态时，用无血清的1640培养液同步化24 h，使多数细胞处于G0期。用一定剂量的无菌注射用水稀释肝素钠注射液(50 mg/mL) ...... 濡傛灉鎮ㄥ湪浣跨敤鎵嬫満绛夋祦瑙堟椂鏃犳硶鏌ョ湅鎴栦笅杞藉叏鏂囷紝鍙兘鏄鎼滅储寮曟搸澶辩湡鈥滆浆鐮佲€濓紝璇风偣鍑诲睆骞曟渶涓嬫柟鐨勨€滅數鑴戠増鈥濇垨鈥滃師缃戦〉鈥濊闂€�


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