1.1 一般资料 选取于2015年3月在本院行精液分析患者的30例精液标本，患者年龄25～35岁(平均31岁)，禁欲2～7 d，手淫法取精。精液量2～5 mL，15 min内均完全液化。同一例精液一式3份，分别在精液取出后15、30 min及60 min后行精液冻存，即按所有样本按孵育时间的不同分为A(15 min)、B(30 min)、C(60 min)三组，每组30例，每例标本精液量为0.5 mL。冷冻前精子浓度均≥15×106/mL，前向运动(progressive motility，PR)精子≥32%，正常形态精子≥4%。

    1.2 试剂与仪器 冷冻保护剂使用Quinn’s Advantage TM Sperm Freezing Medium，液氮罐为MVE XC47/11-10型，标本在液氮蒸气中直接熏蒸降温。精子冷冻储存容器选用 Greiner bio-one 生产的1 mL低温冻存管(REF：123278)。

    1.3 方法

    1.3.1 精子冷冻 对精液按不同时间进行冻存，逐滴把一份精子冷冻培养基(Quinn’s Advantage TM Sperm Freezing Medium)加进一份液化好的精液样本 ......