1.3 免疫组织化学染色方法 标本经4%甲醛固定，常规石蜡包埋，先行HE染色确定，选取无出血、无坏死区域，4 μm厚度组织连续切片，常规二甲苯脱蜡，梯度酒精脱水，水化后在含1% H2O2的甲醇中浸泡10 min以阻断内源酶，枸橼酸盐微波高压抗原修复，自然冷却至室温，磷酸盐缓冲液(PBS)洗过后加入用0.01 mol/L PBS稀释至1∶100的一抗——抗M2-PK抗体，室温下孵化60 min，二抗及过氧化物酶标记的链霉素亲和素抗体于37 ℃温箱孵育30 min，PBS液洗涤3次，DAB底物显色，苏木素复染核，梯度酒精脱水，树脂胶封片，显微镜下观察。用PBS液代替一抗作阴性对照。

    1.4 结果判定 免疫组化染色PKM2主要表达于细胞胞浆，阳性着色为棕黄色颗粒状，染色愈浓代表阳性表达愈强。由2名病理科医师采用双盲法阅片的方式来评估免疫组化的结果。结果评定：根据阳性染色区域所占总区域的百分比分别计分：

    0分(0)，1分(1%～25%)，2分(26%～50%)，3分(51%～75%)和4分(76%～100%)。根据染色的程度不同分别计分：0分(阴性，无染色)，1分(弱阳性，浅黄色) ......