IFNα—2b对白血病K562细胞增殖及FAK mRNA表达的影响(2)
10 μL加入,混匀,孵育4 h(37 ℃,5% CO2),加入含SDS、异丁醇及10M HCl的细胞裂解液100 μL,孵育12~20 h(37 ℃),丹尼酶标仪检测各组吸光度(波长设570 nm)。计算公式:抑制率=1-(实验组吸光度-空白组吸光度)/(阴性组吸光度-空白组吸光度)×100%。1.2.2 IFNα-2b对白血病K562细胞FAK mRNA表达的影响 RT-PCR分别测阴性对照组、IFNα-2b终浓度为0.25、0.5、1、2万U /mL作用48 h FAK mRNA表达水平。实验步骤:(1)Trizol法抽提总RNA;(2)RNA样品浓度测定和质量鉴定;(3)设计及合成引物内参及FAK:由上海生物工程有限公司协助合成,从基因库中获得全基因序列,利用oligo v6.0软件设计引物。内参选择人GAPDH,上游引物:5’-GGCACAGTCAAGGCTGAGAATG-3’,下游引物:5’-ATGGTGGTGAAGACGCCAGTA-3’FAK ......
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