SIRT1选择性剪接变异体SIRT1—ΔExon8 mRNA在幼龄和老龄小鼠海马组织的表达改变及意义(2)
1 材料与方法1.1 实验动物 幼龄小鼠(42~56 d)、老龄小鼠(12个月龄)各5只,均购自长沙天勤生物技术有限公司。
1.2 引物序列设计和合成 根据Pubmed Gene提供的SIRT1基因的RNA序列,用Primer Premier软件设计SIRT1-FL与SIRT1-ΔExon8的引物,并由invitrogen公司合成,普通PCR扩增引物序列为:SIRT1 F:5’-TGAAGTTGACCTCCTCATTGT-3’,SIRT1 R:5’-ATGTGCCACTGTCACTGTTA-3’。RT-PCR扩增引物序列:β-Actin F:5’-GGCACCACACCTTCTACAATG-3’,β-Actin R:5’-GTGGTGGTGAAGCTGTAGCC-3’;SIRT1-ΔExon8 F:5’-GTGAAGCTGTTCGTGGAGAC-3’,SIRT1-ΔExon8 R:5’-ACAAACAGGTATTGATTACTTGGA-3’;SIRT1-FL F:5’-TAGCACTAATTCCAAGTTCTATACC-3’ ......
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