布渣叶总生物碱在高脂血症大鼠中的作用机制分析(2)
1 材料与方法1.1 材料 布渣叶饮片(批号:20141103,产地:广西,购自广州市中芝源中药有限公司),6~7周龄Wistar大鼠60只,雌雄各半,平均体重(200.31±30.28)g,由自广州医科大学动物实验室提供。
1.2 实验方法
1.2.1 布渣叶总生物碱的提取、分离纯化与制定质量标准 取布渣叶饮片20 kg,加入0.1%盐酸溶液煎煮2次,第1次16倍量,第2次12倍量,每次30 min,过滤,合并滤液,浓缩至100 mL,加入盐酸调pH值至4,采用0.5 BV/h通过经预处理的732型阳离子交换树脂,采用纯净水洗脱至无色,采用2.5 BV/h的0.25%氨水溶液洗脱,收集洗脱液,过滤,滤液减压回收乙醇至无醇味,浓缩至稠膏,真空干燥,粉碎,即为布渣叶总生物碱。取布渣叶总生物碱稠膏,采用3 mL蒸馏水溶解,采用浓氨水调pH值至9~10,采用600 mL三氯甲烷萃取无生物碱反应,采集三氯甲烷相,减压回收有机溶剂,采集三氯甲烷粗提物,硅胶柱层析浸膏,采用乙酸乙酯/石油醚、甲醇/乙酸乙酯梯度洗脱,反复复硅胶柱层析、凝胶Sephadex-LH20柱层析及半制备HPLC、重结晶纯化等方法对粗提物进行分离三氯甲烷粗提物,采集布渣叶生物碱单体化合物。采用等波谱解析方法鉴定其化学结构 ......
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