1 材料与方法

    1.1 实验动物 豚鼠10只，1～2 个月龄，雌雄不限。

    1.2 主要试剂 DMEM培养基、重组干细胞因子、pluronic F-127、V型胶原酶购自Sigma公司，FBS(Gibco公司)，fluo-4AM(Molecular Probes，美国)，二甲基亚砜(DMSO，上海生工)。

    1.3 主要仪器与设备 SW-CJ-2FD超净工作台，S/N27709-1462 CO2培养箱，激光共聚焦显微镜META.510 Zeiss(德国蔡司公司)。

    1.4 方法

    1.4.1 原代细胞培养 颈部脱臼法处死豚鼠，75%酒精浸泡10 min，无菌条件下离断膀胱颈取出膀胱。自膀胱颈部向底部纵行剖开并去除膀胱黏膜，解剖显微镜下去除浆膜层，在磷酸盐缓冲溶液中加双抗(链霉素100 mg/L和青霉素100 U/L)浸泡膀胱肌层10 min。将膀胱肌层剪成大小约1 mm×1 mm×1 mm的组织小块，以磷酸盐缓冲溶液漂洗2次，加入胶原酶Ⅴ溶液(10 g/L)，37 ℃培养箱中消化，30 min后见组织块成絮状，离心管中离心 ......