1.2 方法 免疫组织化学染色PAP法染色，标本脱蜡水化后，3%过氧化氢、TENG-T(Tris 10 mmol/L，EDTA 5 mmol/L，NaCl 150 mmol/L，0.25% gelatin，0.05% Tween-20，pH 8.0)依次各处理40 min，以减低内源性过氧化物酶活性和非特异性背景染色。处理后的切片分别用小鼠抗α-SMA单克隆抗体(1∶800，武汉博士德生物工程有限公司)，兔抗ISL-l多克隆抗体(1∶120，Abcam公司)，山羊抗TBX3多克隆抗体(1∶150，Santa Cruz公司)室温下过夜孵育。根据所孵育一抗的不同，滴加相对应的二抗和三抗，时间均为2 h，兔过氧化物酶-抗过氧化物酶复合物孵育1.5 h；DAB显色，出现呈棕黄色的阳性结果时滴加蒸馏水终止。常规脱水、透明、中性树胶封片，抗体用PBS(pH 7.4)稀释。

    2 结果

    (1)胚龄9 d，呼吸内胚层ISL-1和TBX3细胞阳性表达并在此聚集，流出道呈管状，在流出道的远段ISL-1阳性细胞向近段延伸并逐渐表达α-SMA，见图1A～C ......