人脑胶质瘤干细胞增殖中NOTCH信号的调控作用(2)
1 资料与方法1.1 一般资料 此次研究所采用的人脑胶质瘤新鲜标本取自2011年4月-2014年4月于本院进行人脑胶质瘤手术的30例患者,其中14例为低度恶性胶质瘤,16例为高度恶性胶质瘤。另择同期进行颅内减压术20例患者的正常新鲜脑组织作为对照组。本研究采用的U251恶性胶质瘤细胞株和CHG-5胶质瘤细胞株由本院细胞实验室提供。
1.2 方法 (1)细胞培养:胶质瘤新鲜标本及U251、CHG-5细胞株的分选采用免疫磁珠法。将分离出的脑胶质瘤干细胞进行培养,控制每瓶细胞数约为1×105个,向细胞培养瓶内分别加入含血清培养基及无血清培养基,培养温度为37 ℃、二氧化碳浓度为5%,湿度为95%。每隔2天对细胞进行换液处理,培养约5 d左右进行传代。待细胞生长状态良好时进行实验[6-8]。(2)NOTCH-1信号通路相关基因的表达检测:采用Trizol法提取胶质瘤干细胞的总RNA,采用荧光定量PCR法对NOTCH-1信号通路相关基因的表达进行检测,检测的基因包括NOTCH-1、CBF-1、HES-1,内参基因选择GAPDH,实验所采用的引物由南京金斯瑞生物科技有限公司提供,SYBR green由北京康为世纪生物科技有限公司提供 ......
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