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编号:12956084
心肌细胞肥厚与TNNI3K基因表达的相关性研究(2)
http://www.100md.com 2016年8月15日 《中国医学创新》 2016年第23期
     1.3.3 心肌细胞表面积的观察和测量 体外培养的新生乳鼠心肌细胞AngⅡ处理后4 d,在倒置相差显微镜(×400放大)下随即挑选10个区域进行拍照,图像分析软件 (ImageProPlus 6.0)对挑选的细胞进行表面积的测量,取其均值进行比较。

    1.3.4 免疫组织化学法测定心肌细胞TNNI3K基因表达的变化 将6孔细胞培养板内放置预先消毒处理的盖玻片,接种原代培养的新生大鼠心室肌细胞,48 h后弃去培养液,PBS洗两次,以95%乙醇固定20 min,洗涤固定过程完毕后均由冷风吹干,然后进行间接细胞免疫化学染色。保持室温恒定,加0.3%H2O2-甲醇15 min,双蒸水洗涤3次;0.5% Triton X-100-PBS作用5 min,PBS洗涤3次,加小鼠抗人TNNI3K抗体(1∶200稀释),4 ℃环境下孵育过夜。PBS洗涤3次;37 ℃环境下,辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗小鼠Envision工作液孵育45 min,PBS洗涤3次,滴加显色剂DAB/H2O2,避光显色5 min,清水冲洗 ......
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