1.2.3 Western-blot法检测各组细胞蛋白表达 培养48 h后收集细胞，加入蛋白裂解液提取各组蛋白，用考马斯亮蓝法测定蛋白浓度后分别放于-70 ℃保存。每组样本取50 μg总蛋白，10%SDS-PAGE凝胶电泳后在冰盒中电转至PVDF膜；5%脱脂奶粉37 ℃恒温箱中封闭2 h，再分别加入兔抗snail(1∶200稀释)、GAPDH多克隆抗体，4 ℃冰箱摇床上孵育过夜。洗膜后用辣根过氧化物酶标记的二抗(1∶2000)室温孵育1 h，ECL化学发光法显色。WB条带信号强度采用Lab Work45图像分析软件系统进行半定量分析，测定各个条带的积分光密度值(IOD)，以snail与内参GAPDH条带的IOD比值代表其蛋白的相对表达量。

    1.3 统计学处理 采用SPSS 18.0軟件对所得数据进行统计分析，计量资料用(x±s)表示，组间两两比较采用LSD方法分析，多组间比较采用单因素方差分析。P<0.05为差异有统计学意义。

    2 结果

    2.1 足细胞原代培养结果及鉴定 消化传代后的足细胞呈星形，细胞质和细胞核较增殖状态明显增大 ......