抗胶质瘤Ⅰ号方对脑胶质瘤细胞侵袭性的影响(2)
1 材料与方法1.1 材料与试剂 (1)C6大鼠脑胶质瘤细胞株由中国医学科学院基础医学研究所基础医学细胞中心提供。(2)主要试剂羊抗大鼠PI3K和PKB购自英国Abcam公司,小鼠抗大鼠β-actin抗体购自美国Santa Cruz公司。抗胶质瘤Ⅰ号组成成分包括鸦胆子口服液、白花蛇草、蜈蚣、水蛭、枸杞子、土茯苓、猪苓、葛根。
1.2 方法
1.2.1 胶质瘤细胞培养 胶质瘤细胞采用F-12培养基培养进行培养,培养基内加入2.5%胎牛血清和15%马血清,37 ℃孵箱内孵育,并通以5%的CO2。细胞生长至对数生长期后,随机分为实验组和对照组。实验组为抗胶质瘤Ⅰ号作用0.1、0.5、1、2、3、4 h 六个时间点,对照组在相应的时间点加入等量生理盐水,每组选10个标本。
1.2.2 免疫印迹法检测胶质瘤细胞内的PI3K和PKB蛋白表达水平 培养的胶质瘤细胞给予抗胶质瘤Ⅰ号后,收集不同时间点(0.1、0.5、1、2、3、4 h)的胶质瘤细胞,细胞进行裂解、超声破碎后,低温离心并收集上清液,采用7.5%的SDS-PAGE进行电泳 ......
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