1 材料与方法

    1.1 细胞株选择 人结直肠癌细胞株选自结直肠癌患者肿瘤原代培养，10%FBS的DMEM培养基中(青霉素和链霉素各100 U/mL)，置于37 ℃，5%CO2中培养，25 g/L胰酶消化，实验用细胞均处于生长对数期。

    1.2 实验方法

    1.2.1 稳定转染过表达的IL-6和低表达的结直肠癌细胞 将处于对数期的人结直肠癌细胞株种于六孔板中，保证每孔细胞量为(3～8)×105，lipo2000加入5 μL用100 μL无血清培养基混匀，静置5 min，同时过表达IL-6的质粒12 μL于100 uL无血清的培养基中混匀，5 min后两者混匀20 min，然后加入1800 μL的无血清培养基，48 h后提蛋白Western-blot检测。

    1.2.2 蛋白的提取 (1)运用碧云天蛋白试剂盒提取细胞上清蛋白(由于IL-6是外分泌蛋白所以需要提取细胞上清进行蛋白检测)。(2)用BCA进行定量。按照A液比B液以50∶1的比例进行配置BCA溶液。取收集的细胞上清2 μL ......