耐碳青酶烯类肺炎克雷伯菌的替加环素MIC药敏试验和临床特点分析(2)
1.3 主要仪器设备 VlTEK2-compect全自动细菌分析仪(法国生物梅里埃公司),替加环素(Selleck公司),96孔板(Nunc公司),MH肉汤(上海嘉楚生物工程有限公司),VITEK2细菌鉴定卡(法国生物梅里埃公司)。1.4 方法 微量肉汤稀释法药敏试验具体如下。
1.4.1 菌悬液的制备 (1)菌液培养:取冷冻纸片法保存的待测菌种接种于血平板培养基,置35 ℃温箱静止培养16~18 h;(2)配置标准浓度菌液:取血平板上肉眼可见的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌落1个,溶于3~4 mL麦氏标准管,比浊仪上调整至0.5麦氏浊度,此时细菌浓度相当于(1~2)×108 cfu/mL,制成待测菌液;(3)上样菌液稀释:将待测菌液在步骤(2)所得稀释倍数的基础上用MH肉汤再稀释1000倍,此时菌液浓度为(1~2)×105 cfu/mL即为待测菌悬液。注意:测定麦氏浊度所需菌液应在生物安全柜中无菌取样,剩余菌液还需实验,接种于血平板上检测待测菌纯度。
1.4.2 抗菌药物的制备 抗生素母液配制:参照NCCLS标准上抗菌药物相应的R(抗药)值制备待测抗菌药物(母液浓度要遠远大于R值,至少160倍),取替加环素药粉(有效浓度>99%)12.7 mg ......
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