1.4 样品处理 在4 ℃预冷Tris-buffered sucrose solution(10mM Tris，250mM sucrose)中洗涤细胞，重复3次去除残余培养基。每个10 cm皿中加入Standard lysis buffer(7M Urea，2M Thiourea，30mM Tris，4% CHAPS，)300 μL，刮下細胞并充分裂解，超声破碎。4 ℃，20000 g离心30 min，转移上清液进行蛋白质纯化。蛋白质的纯化和定量严格按照2D Clean-up Kit或2D Quant Kit说明书进行。

    1.5 2D DIGE 样品的荧光标记按照笔者已经报道过的方法进行操作[13-14]，简述如下：按照2D DIGE实验设计，在4 ℃条件下，每个样品50 μg用400 pmol Cy2、Cy3或者Cy5 在冰浴、避光条件下标记30 min，然后用Lysine solution终止反应。第一向等电聚焦程序如下：30 V ......