Flavopiridol对胃肠道间质瘤细胞GIST882增殖、侵袭、凋亡及细胞周期的影响(2)
1.3 MTT实验 将GIST882细胞胰酶消化悬浮,计数调整细胞密度为1×104,均匀接种于96孔板内,待细胞生长至指数增长期时更换含有不同浓度Flavopiridol的培养液,每组药物设立6个重复孔。分别于加药后12、24、36、48、72 h进行MTT检测:加入20 μL MTT(0.5%)继续培养4 h,弃去液体,加入150 μL DMSO,水平摇床轻摇5 min,上酶标仪检测490 nm波长下的吸光度值(A)。计算细胞生长抑制率:抑制率(%)=1-药物孔A/对照孔A×100%。1.4 侵袭实验 将GIST882细胞悬浮后接种于transwell小室上层,细胞密度1×104,上层血清浓度为10%,含不同浓度的Flavopiridol。下层血清浓度为20%。置于孵箱培养24 h后去除上层的细胞,中性福尔马林固定,苏木素染色。观察细胞穿膜情况,显微镜下随机计数10个200倍视野细胞数量,取平均值。
1.5 细胞凋亡及周期检测 计数并调整GIST882细胞密度为1×104个/mL,接种到6孔板中,细胞至指数增长期时加入不同浓度的Flavopiridol ......
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