1.2 方法

    1.2.1 用6孔板接种膀胱癌5637细胞2×105个细胞/孔(约2 mL)，培养12 h后。未加CCL18设为对照组(A组)；首先接受20 ng/mL的预处理多克隆兔抗人CCR8抗体4 h，然后50 ng/mL CCL18处理(B组)；接受50 ng/mL CCL18处理为(C组)；接受100 ng/mL CCL18处理为(D组)，继续培养36 h后。western blot检测E-cadherin、MMP-2、VEGF-C蛋白表达变化情况。

    1.2.2 细胞种板后分组：SC组(即实验组)转染CCR8 siRNA；NC组(即阴性对照组)转染非特异性脂质体；CC组(即空白对照组)未经任何处理。实验各组全部添加50 ng/mL CCL18，做培养处理。经过6 h，放置在荧光显微镜下，对荧光细胞数进行观察，转染效率=(荧光细胞数/同一视野白光下的细胞总数)×100%。

    1.2.3 收集转染24、48、72 h后以上各组细胞，使用TRIzol试剂及Invitrogen试剂，将总RNA提取出，RNA浓度的测定使用超微量分光光度仪。使用TAKARA试剂盒、qRT-PCR Mix试剂盒进行qRT-PCR反应 ......