-78 ℃冰箱保存，10%中性福尔马林溶液固定，然后进行石蜡包埋，制成石蜡块储存。

    1.2 免疫组织化学染色检测 采用免疫组织化学染色SABC法。石蜡块经切片机连续3 μm切片制成石蜡切片，经烤片机60 ℃烘烤0.5 h使切片紧密黏附。切片脱蜡至水，抗原热修复。加入5%BSA封闭液37 ℃孵育30 min甩干。分别滴加一抗小鼠抗人HIF-1α、TLR4单克隆抗体(sc-13515，sc-293072购于美国Santa Cruz公司)，工作浓度为1∶50，4 ℃过夜。滴加二抗生物素标记山羊抗小鼠IgG(购于武汉博士德SA1021-小鼠IgG即用型免疫组化染色试剂盒)，37 ℃孵育30 min。PBS冲洗5 min×3次。滴加SABC，37 ℃孵育30 min，PBS冲洗5 min×3次。滴加DAB，镜下控制反应时间，然后自来水冲洗终止反应。苏木素复染2 min，放入盐酸酒精分化液中分化数秒。脱水、透明、封片。PBS代替上述一抗做阴性对照。

    1.3 免疫组织化学染色结果判定 HIF-1α以细胞质或细胞核出现棕黄染色为阳性细胞，TLR4以细胞膜或细胞质出现棕黄染色为阳性细胞。使用美国aperio公司Scanscope数字病理扫描系统，每张组织切片于400倍镜下随机选取5个不重叠的阳性区域，统一测量窗下，读取锁定区域的灰度值 ......