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编号:13203165
洋葱中黄酮类化合物对结核分枝杆菌的抑菌作用研究(3)

     1.2.4 结核分枝杆菌-DNA水平检测 采用RPMI-1640培养基对培养的细胞进行洗涤,清除游离结核分枝杆菌,严格按照结核分枝杆菌基因(TB-SA)检测试剂盒的操作步骤,加入结核分枝杆菌-DNA提取液用于裂解DNA,孵育30 min后13 000 r/min离心10 min,取上清液0.2 μL,置于毛细反应管中,滴加17.8 μL反应液+0.2 μL Taq酶+0.03 μL尿嘧啶-N-糖基保护液,摇匀,置于AM5000实时荧光定量PCR检测系统进行DNA扩增,检测结核分枝杆菌DNA扩增Ct值及DNA拷贝数,拷贝数采用对数进行表示。

    1.2.5 细胞培养液中细胞因子水平测定 收集细胞培养上清液,采用Freedom EVO 75全自动酶联免疫吸附分析仪,采用酶联免疫吸附法(ELISA),严格按照试剂盒步骤进行操作,检测细胞培养液中IFN-γ、IL-1β水平。

    1.3 统计学处理 所有统计数据均统一整理,采用SPSS 17.0软件包分析,符合正态性的计量资料采用(x±s)表示,结核分枝杆菌对各种药物的敏感率采用百分率(%)表示,予以RxC 字2检验,各组巨噬细胞吞噬的结核分枝杆菌DNA扩增Ct值及拷贝数、细胞培养液中IFN-γ、IL-1β、IL-6水平对比予以独立样本t检验 ......
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