1.4 基因组DNA的获取 常规酚/氯仿提取白细胞基因组DNA。

    1.5 基因组聚合酶链反应(PCR) (1)引物合成：PAGE方式合成KCNE1基因的3对引物[4]，由广州广譽生物科技有限公司合成，引物序列，见表1。(2)PCR扩增：使用高保真PCR酶KOD-Plus-Neo，以基因组DNA为模板配制以下反应体系(50 μL)，见表2。PCR反应程序：94 ℃预变性

    3 min，98 ℃变性10 s(循环30次)，58 ℃退火30 s(循环30次)，68 ℃延伸20 s(循环30次)，68 ℃再延伸5 min[4]。

    1.6 DNA测序 使用3700DNA测序仪对浓度为5 μmol/L的纯化后的聚合酶反应物进行DNA正反双向测序。为进一步验证检测结果的正确性，使用T-VECTOR对纯化后的PCR产物导入DH5α感受态细胞，经过正反双向检测所提取的阳性克隆质粒发现，直接测序的结果与其相同。

    1.7 突变位点的确定 对测序结果KCNE1 DNA全长使用Genebank blast软件进行比对 ......